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内容简介

　　《临床分子生物学检验技术实验指导》包括32个实验，内容分为七大部分：分子生物学检验技术实验室介绍；核酸的分离与纯化；核酸扩增技术；核酸分子杂交技术；分子克隆技术；其他分子检验技术；创新性实验、设计性实验及综合性实验。各校可根据自身条件、要求的不同进行取舍和组合，建议实验教学时数为30-60学时。
　　《临床分子生物学检验技术实验指导》具有以下特点：①注重基础知识和技能的训练，从微量移液器的使用到分子生物学实验室的规范操作及基本实验，从试剂配制到具体操作，力求详细，方便教学；②加强有临床应用价值或应用前景的技术及项目的介绍，如PCR技术、基因突变的检测等；③增加刨新性实验、设计性实验及综合性实验，增强对学生创新能力和综合素质的培养。有些综合性、设计性实验来自科研课题，内容新、方法先进，有利于学生掌握新知识、新技术。

目录

第一部分 分子生物学检验技术实验室
一、分子生物学检验技术实验须知
二、分子生物学检验技术实验室介绍
三、分子生物学检验技术常用仪器介绍
四、分子生物学实验室生物安全

第二部分 核酸的分离与纯化
实验1 真核基因组DNA的分离与纯化
实验2 真核细胞mRNA的分离与纯化
实验3 质粒DNA的提取
实验4 核酸的鉴定

第三部分 核酸扩增技术
实验5 聚合酶链反应
实验6 PCR-RF1P检测线粒体DNAA3243G异质性突变
实验7 等位基因特异性扩增法检测结核分枝杆菌rpoB基因突变
实验8 TRAP一银染法检测端粒酶活性
实验9 多重PCR检测测a-地中海贫血基因缺失
实验10 PCR-SSCP检测苯丙酮尿症苯丙氨酸羟化酶基因外显子7突变
实验11 实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒（HBv）核酸
实验12 逆转录．聚合酶链反应检测甘油醛-3-磷酸脱氢酶mRNA

第四部分 核酸分子杂交技术
实验13 探针的制备
实验14 DNA分子杂交
实验15 RNA分子杂交
实验16 荧光原位杂交
实验17 反向斑点杂交法检测B-地中海贫血

第五部分 分子克隆技术
实验18 DNA的限制性内切酶酶切反应
实验19 目的片段的连接
实验20 感受态细胞的制备及重组子转化
实验21 重组子的鉴定

第六部分 其他分子检验技术
实验22 真核细胞基因转染技术
实验23 Western印迹
实验24 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验25 H1A基因分型
实验26 乙型肝炎病毒基因分型(芯片法)
实验27 PCR-荧光探针法检测CYP2C19基因多态性

第七部分 创新性实验、设计性实验及综合性实验
实验28 采用导流杂交基因芯片技术进行人乳头瘤病毒基因分型
实验29 采用多重连接依赖探针扩增技术检测抗肌萎缩蛋白基因突变
实验30 人肝癌相关microRNA一21的定量检测
实验31 荧光素酶报告基因的制备
实验32 基因重组
附录 分子生物学检验技术实验中常用试剂和缓冲液的配制

精彩书摘

　　《临床分子生物学检验技术实验指导》：
　　三、分子生物学检验技术常用仪器介绍（一）微量移液器微量移液器（pipette）是分子生物学中最常用的计量仪器。其工作原理是通过内部密封的不锈钢活塞和弹簧，用手指按压和放松按钮来吸取和排出液体。在使用移液器的过程中，应注意以下几方面：①必须根据设计容量选用适当型号的移液器，调整数轮的读数不得超过其标称的容量范围，否则会损坏移液器；②吸取不同类别的溶液应更换吸头，防止试样之间交叉污染，不同个体的体液标本也应更换吸头，否则会严重影响检验结果；③新吸头在使用前可吸排溶液几次，浸渍吸头以消除测量误差；④移液器吸液后严禁倒置、平放，以免溶液流入内腔，损坏活塞；⑤移液器不用时应存放在专用的支架上，不得任意放置；⑥长时间不用或刚取出的新移液器应轻轻用手推动按钮上下按压几次，再进行正常使用；⑦注意正确读数，目前有的移液器是电子显示，一般难以出错，但对于手动调节的应特别注意。吸取液体时只能轻按第一挡，排出液体时需要按到第二挡；吸取液体时不可快速吸取。（二）水纯化装置分子生物学实验对用水质量要求极高，器皿需经酸泡和自来水洗净后用双蒸水漂洗数次，配制各种溶液更是要求用三蒸水或超纯水。水纯化装置主要包括：单蒸器、石英玻璃双蒸馏器、离子交换器及超纯水装置等。（三）离心机离心机是分子生物学实验中最常用的一类仪器，主要用于收集和分离细胞、细胞器和生物大分子等。实验用离心机可按其转速分为低速离心机（普通离心机）、高速离心机和超速离心机三种类型。
　　在分子生物学实验中应用最多的是台式高速离心机，一般分为常温和冷冻两种，最大转速一般在12000～20000g，这类仪器特别适合于生物大分子在Eppendorf管内微量操作后的处理，最少可供0.05ml样品的离心。
　　（四）电泳装置
　　电泳装置由电泳仪和电泳槽两部分组成。它主要用于检测、鉴定各种生物大分子的纯度、含量及描述它们的特征，此外它还是分离、纯化、回收和浓缩样品的主要工具。
　　1.电泳仪它是作为电泳时的外加电源设备，将220V交流电整流后通过稳压器，它既能输出稳定的电流，又能输出稳定的电压，起到在被分离样品两端加外接电场的作用。常见的电泳仪有常压电泳仪（输出电压为0～500V，电流0～150mA）、中压电泳仪（输出电压400～1000V）、高压电泳仪（输出电压高于lkV），另外还有一些特殊的电泳仪，如毛细管电泳仪、脉冲电场凝胶电泳仪、转移电泳仪等。
　　2.电泳槽电泳槽是电泳的主要部件，是样品分离的场所。槽内装有电极、缓冲液槽、电泳支持架等，有的还有散热装置如循环水等。电泳槽种类很多，有平卧式、垂直板式、圆柱式、立板式、悬挂式等。
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前言/序言

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