精編分子生物學實驗指南(第5版上下)生命科學實驗指南係列 大腸杆菌質粒和噬菌體DNA的製 pdf epub mobi txt 電子書 下載 2025

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圖書標籤:

• 分子生物學
• 實驗指南
• 大腸杆菌
• 質粒
• 噬菌體
• DNA
• 生命科學
• 實驗
• 生物技術
• 遺傳學

店鋪： 書香齋圖書專營店

齣版社： 科學齣版社

ISBN：9787030203366

商品編碼：29588810228

齣版時間：2008-05-01

商品參數

精編分子生物學實驗指南(第5版上下)生命科學實驗指南係列
	定價	398.00
	齣版社	科學齣版社
	版次	1
	齣版時間	2008年05月
	開本	16開
	作者	(美)F.M.奧斯伯//R.布倫特//R.E.金斯頓//D.D.穆爾//J.G.塞德曼等|譯者:金由辛//包慧中//趙麗雲
	裝幀
	頁數
	字數
	ISBN編碼	9787030203366

內容介紹

F.M.奧斯伯、R.布倫特、R.E.金斯頓、D.D.穆爾 、J.G.塞德曼等主編的《精編分子生物學實驗指南( 第5版上下)》是zhiming度很高、不斷*新的《Current Protocols in Molecular Biology》係列的精編版 本。新版對原有內容進行瞭修訂和*新，包括：大腸 杆菌、質粒和噬菌體，DNA的製備和分析，DNA和RNA 的酶學操作，RNA的製備和分析，重組DNA文庫的構建 ，重組DNA文庫的篩選，DNA序列測定，剋隆化DNA的 誘變，DNA導入哺乳動物細胞，蛋白質分析，免疫學 ，DNA-蛋白質相互作用，釀酒酵母，原位雜交和免疫 組織化學，聚閤酶鏈反應，蛋白質的錶達，蛋白質磷 酸化的分析，生物信息學，蛋白質相互作用的分析等 ；又新增瞭染色質的裝配與分析，核酸陣列，組閤文 庫的建立和使用，單個細胞或一群細胞間差異錶達基 因的發現和分析四章內容。 
     本書可供高等院校和科研機構從事分子生物學研 究的科研工作者和研究生參考。

目錄

譯者序 
前言 
**章 大腸杆菌、質粒和噬菌體 
1.1 培養基的製備及細菌學工具 
1.1.1 極限培養基 
1.1.2 豐富培養基 
1.1.3 固體培養基 
1.1.4 實驗工具 
1.2 在液體培養基中培養 
1.2.1 基本方案1 過夜培養 
1.2.2 基本方案2 大體積培養 
1.2.3 基本方案3 利用計數闆監測生長情況 
1.2.4 基本方案4 利用分光光度計監測生長情況 
1.3 固體培養基上培養 
1.3.1 基本方案1 通過連續稀釋法滴定和分離細菌菌落 
1.3.2 基本方案2 通過平闆劃綫法分離單菌落 
1.3.3 基本方案3 通過鋪平闆分離單個菌落 
1.3.4 基本方案4 影印平闆 
1.3.5 輔助方案菌株的保存和復蘇 
1.4 經典細菌遺傳學選論 
1.5 質粒載體 
質粒載體的選擇 
1.6 質粒DNA的小量製備 
1.6.1 基本方案1 堿裂解小量製備 
1.6.2 備選方案 96孔微量滴定闆堿裂解法 
1.6.3 基本方案2 煮沸小量製備法 
1.7 質粒DNA的大量製備 
1.7.1 基本方案1 堿裂解法製備粗製裂解物 
1.7.2 基本方案2 氯化銫/溴化乙錠平衡離心法 
1.7.3 備擇方案 利用陰離子交換層析或分子篩層析純化質粒DNA 
1.8 將質粒DNA導入細菌細胞 
1.8.1 基本方案1 CaCl2轉化法 
1.8.2 備擇方案 一步法製備和轉化感受態細菌 
1.8.3 基本方案2 高效率的電轉化方法 
1.9 入噬菌體概述 
1.9.1 裂解性生長 
1.9.2 溶源性生長 
1.10 作為剋隆載體的入噬菌體 
1.10.1 用入噬菌體的優點 
1.10.2 選擇插入的DNA 
1.10.3 入噬菌體來源的剋隆載體的圖譜 
1.11 入噬菌體鋪平闆産生噬斑 
1.11.1 基本方案1 通過連續稀釋法分離單個噬斑 
1.11.2 基本方案2 噬菌體轉染和體外包裝構建 
1.12 培養入衍生的噬菌體載體 
1.12.1 基本方案 通過平闆裂解製備噬菌體庫 
1.12.2 備擇方案 製備液體裂解物 
1.13 從噬菌體裂解液中製備入DNA 
基本方案 通過分級平衡梯度離心製備DNA 
1.14 源於絲狀噬菌體的載體 
1.15 利用M13噬菌體衍生載體製備單鏈DNA 
基本方案 利用輔助噬菌體從質粒製備單鏈DNA 
第2章 DNA的製備和分析 
電泳及其應用 
凝膠和電路 
2.1 水溶液中DNA的純化和濃縮 
2.1.1 基本方案 DNA的酚抽提和乙醇沉澱 
2.1.2 備擇方案1 異丙醇沉澱DNA 
2.1.3 輔助方案1 丁醇濃縮DNA 
2.1.4 輔助方案2 醚抽提法去除殘存酚、氯仿或丁醇 
2.1.5 備擇方案2 矽膜離心柱法純化DNA 
2.1.6 備擇方案3 RNA及DNA稀溶液的純化和濃縮 
2.1.7 備擇方案4 乙醇沉澱法去除低分子質量的寡核苷酸和核苷三磷酸 
2.2 陰離子交換色譜法純化DNA 
基本方案 
2.3 從哺乳動物組織中製備基因組DNA 
基本方案 
2.4 從植物組織中製備基因組DNA 
2.4.1 基本方案 氯化銫離心法製備植物DNA 
2.4.2 備擇方案 CTAB製備植物DNA 
2.5 從細菌中製備基因組DNA 
2.5.1 基本方案 細菌基因組DNA的小量製備 
2.5.2 備擇方案 氯化銫法大規模製備細菌基因組DNA 
…… 
第3章 DNA和RNA的酶學操作 
第4章 RNA的製備和分析 
第5章 重組DNA文庫的構建 
第6章 重組DNA文庫的篩選 
第7章 DNA序列測定 
第8章 剋隆化DNA的誘變 
第9章 DNA導入哺乳動物細胞 
**0章 蛋白質分析 
**1章 免疫學 
**2章 DNA-蛋白質相互作用 
**3章 釀酒酵母 
**4章 原位雜交和免疫組織化學 
**5章 聚閤酶鏈反應（PCR） 
**6章 蛋白質的錶達 
**7章 蛋白質磷酸化的分析 
**8章 生物信息學 
**9章 蛋白質相互作用的分析 
第20章 染色質的裝配與分析 
第21章 核酸陣列 
第22章 組閤文庫的建立和使用 
第23章 單個細胞或一群細胞間差異錶達基因的發現和分析 
附錄 
索引 

......

揭秘生命藍圖：深入探索微生物遺傳物質的奧秘 本書是一部精選的生命科學實驗指南，旨在為廣大學子、科研人員以及對微生物遺傳物質轉化與操縱充滿好奇的愛好者們，提供一套詳實、係統且極具操作性的實驗方法。我們聚焦於兩種在分子生物學研究中扮演著至關重要角色的微小但強大的遺傳載體——大腸杆菌質粒和噬菌體DNA，帶領讀者一步步揭開它們在生命活動中所承擔的使命，並掌握在實驗室中高效提取、鑒定與利用它們的核心技術。 第一部分：質粒DNA的提取與鑒定——微觀世界的“生命指令” 質粒，這些獨立於細菌染色體之外的小型環狀DNA分子，是大腸杆菌等細菌細胞中普遍存在的遺傳物質。它們不僅攜帶瞭細菌生存所必需的基因，更重要的是，常常承載著對環境變化至關重要的“附加”基因，例如抗生素抗性基因、代謝相關酶基因等。在分子生物學研究中，質粒因其易於復製、易於修飾且可作為外源基因導入的特性，成為瞭基因剋隆、基因錶達、基因治療等領域不可或缺的工具。 本部分實驗指南將從基礎齣發，詳細闡述大腸杆菌質粒DNA的提取過程。我們將首先探討不同提取方法的原理，包括堿裂解法、SDS裂解法等，並分析它們各自的優缺點以及適用的實驗場景。對於初學者，我們將提供詳細的操作步驟，從菌液的準備、細胞的裂解、DNA的沉澱與純化，到最終的乾燥與溶解，每一個環節都力求清晰明瞭，配以精美的圖示，幫助讀者剋服實驗過程中的潛在睏難。 在提取過程中，選擇閤適的緩衝液、試劑的用量、反應時間以及離心速度等關鍵參數的控製，都將對最終提取的DNA産量和純度産生直接影響。因此，本書將深入解析這些參數的意義，並提供優化建議，幫助讀者在保證實驗成功率的同時，最大化地獲得高質量的質粒DNA。 除瞭基本的提取技術，對提取所得質粒DNA進行鑒定也是至關重要的一環。本書將介紹多種鑒定方法，幫助讀者評估DNA的濃度、純度以及是否存在降解。我們將詳細講解分光光度計在測量DNA吸光度方麵的應用，以評估DNA的濃度和A260/A280比值，並以此判斷DNA中蛋白質的汙染程度。同時，核酸凝膠電泳作為一種分離和鑒定DNA片段的經典技術，在本部分實驗中將得到詳盡的闡述。我們將指導讀者如何製備閤適濃度的瓊脂糖凝膠，如何配製電泳緩衝液，如何加載DNA樣品，以及如何通過電壓、時間等條件控製電泳分離效果。通過電泳條帶的遷移距離和亮度，讀者將能夠初步判斷DNA的分子量大小，是否存在RNA汙染，以及DNA的完整性。 此外，對於需要進一步驗證質粒DNA特性的研究，本書還將介紹限製性內切酶酶切分析。我們將講解不同限製性內切酶的識彆序列和切割位點，並指導讀者如何根據質粒的已知信息設計酶切方案，通過酶切後的DNA片段在凝膠電泳上的分離情況，來驗證質粒的結構，確認插入片段的存在與否，以及插入片段的方嚮等。這些鑒定技術將為後續的基因操作奠定堅實的基礎。 第二部分：噬菌體DNA的製備與鑒定——病毒世界的基因密碼 噬菌體，顧名思義，是專門感染細菌的病毒。它們在細菌的生命周期中扮演著復雜的角色，既可以整閤到細菌基因組中進行潛伏，也可以在細菌細胞內大量復製並最終裂解細胞釋放齣子代噬菌體，從而將自身的遺傳信息傳遞給下一代細菌。噬菌體作為研究基因調控、基因重組、DNA復製以及基因治療的天然工具，在分子生物學領域具有舉足輕重的地位。 本部分實驗指南將側重於噬菌體DNA的製備與鑒定。我們將首先介紹不同類型的噬菌體及其基因組的特點，例如DNA的類型（雙鏈、單鏈）、環狀或綫狀結構等，這將有助於讀者理解後續實驗設計的依據。 噬菌體DNA的製備方法與質粒DNA的提取略有不同，通常需要考慮噬菌體顆粒的組裝、裂解細菌後的DNA釋放以及DNA的純化。本書將詳細介紹經典的噬菌體DNA提取方法，例如酚-氯仿抽提法，並對每一步操作的目的和關鍵點進行深入解析。我們將指導讀者如何高效地獲得純淨的噬菌體DNA，並討論可能影響DNA産量和質量的因素，如噬菌體培養條件、裂解方法以及純化試劑的選擇。 製備好的噬菌體DNA，同樣需要進行嚴格的鑒定。本書將介紹如何利用紫外分光光度計測定DNA的濃度和純度，以及核酸凝膠電泳來評估DNA的完整性和分子量。對於某些特定的噬菌體，其基因組可能呈現齣特殊的結構，例如粘性末端或環狀結構，通過選擇閤適的酶切位點和凝膠電泳條件，讀者將能夠識彆這些特徵。 除瞭常規的鑒定方法，本書還將探討噬菌體DNA的特異性鑒定技術。例如，對於具有特定基因組結構的噬菌體，可以通過設計特異性PCR引物來擴增其基因組中的特定片段，從而確認目標噬菌體的存在。同時，我們將介紹DNA變性梯度凝膠電泳（DGGE）或溫度梯度凝膠電泳（TGGE）等技術，這些技術能夠區分序列上微小差異的DNA片段，對於檢測噬菌體基因組的變異或雜閤情況具有重要意義。 實驗設計與優化：精益求精的科研態度 本書不僅提供瞭詳實的操作指南，更強調瞭實驗設計與優化的重要性。在每一個實驗環節，我們都會引導讀者思考實驗的目的，選擇最閤適的實驗方法，並根據實際情況進行調整和優化。我們將分享一些提高實驗成功率的技巧和經驗，例如如何避免DNA汙染，如何減少核酸酶的乾擾，以及如何選擇最佳的反應條件以獲得最大的産率和最高的純度。 安全與倫理：嚴謹的科研規範 在生命科學實驗中，安全與倫理始終是第一位的。本書在介紹實驗操作的同時，也將重點強調實驗室安全規範，包括個人防護裝備的使用、化學試劑的安全處理以及廢棄物的妥善處置。同時，我們將提醒讀者在進行涉及基因操作的實驗時，務必遵守相關的法律法規和倫理準則，確保實驗的科學性、安全性和閤規性。 應用前景：開啓分子生物學研究新篇章 通過本書的學習，讀者將能夠掌握大腸杆菌質粒和噬菌體DNA製備與鑒定的核心技術。這些技術不僅是分子生物學基礎研究的基石，更是推動生物技術、醫藥研發、基因工程等領域不斷前進的重要驅動力。無論是進行基因錶達調控的研究，還是開發新型的基因治療載體，亦或是從事微生物遺傳多樣性的探索，本書都將為你提供堅實的技術支撐和理論指導，助你在生命科學的廣闊天地中，開啓屬於自己的精彩篇章。 本書力求內容全麵、講解深入、操作性強，旨在成為讀者在分子生物學實驗道路上的得力助手，為深入理解和掌握生命科學的奧秘提供一份寶貴的參考。

評分☆☆☆☆☆

作為一名對微生物遺傳學充滿熱情的初學者，我一直渴望能夠深入瞭解大腸杆菌中質粒和噬菌體DNA的奧秘。市麵上有很多關於分子生物學的書籍，但真正能夠專注於這類特定研究領域的，並且能夠將原理與實踐相結閤的，似乎並不多見。我希望找到一本能夠係統地介紹大腸杆菌質粒和噬菌體的基本結構、復製機製，以及與之相關的DNA提取、分離和分析技術的書籍。我特彆希望這本書能夠詳細地闡述提取質粒DNA和噬菌體DNA時，針對這兩種不同類型的遺傳物質，在實驗操作上會有哪些具體的區彆和注意事項。例如，噬菌體DNA的提取是否需要特殊的裂解方式，或者是否會混入宿主菌的DNA，這些細節上的講解對我來說至關重要。

評分☆☆☆☆☆

我一直對研究原核生物的遺傳物質，特彆是細菌的質粒和噬菌體DNA的提取與分析很感興趣。在我的本科實驗課上，我們曾簡單接觸過這些內容，但感覺知識點零散，缺乏係統性。我希望能夠找到一本能夠深入講解這類實驗原理的書籍，而不僅僅是簡單的操作步驟。例如，質粒DNA的提取，涉及到的裂解細胞、去除RNA和蛋白質、DNA沉澱與洗滌等步驟，每一步的化學原理以及可能影響結果的因素，我都想瞭解清楚。特彆是對於不同種類的細菌，質粒的大小和拷貝數不同，可能需要調整提取方案。我非常希望能找到一本能夠詳細介紹這些變化的，並且能夠解釋為什麼需要這樣做的書，而不是簡單地羅列齣一堆操作。

評分☆☆☆☆☆

我最近在進行一項與基因編輯相關的研究，需要對質粒DNA進行高效的構建和轉化。雖然我之前有過一些分子剋隆的經驗，但對於如何設計和閤成更復雜的質粒，比如包含特定啓動子、報告基因或者多拷貝復製起始點的質粒，我感到有些迷茫。我希望能夠找到一本能夠提供清晰指導的書籍，從質粒載體的選擇，到限製性內切酶切點的設計，再到如何構建多片段連接的質粒，都能夠有詳細的講解。我尤其關注如何優化轉化效率，無論是經典的感受態細胞製備，還是各種電轉化、化學轉化方法，都希望能有更深入的探討，包括不同轉化方法的適用場景和技巧。

評分☆☆☆☆☆

我最近在為我的畢業論文尋找一些實驗操作的細節，特彆是關於分子生物學方麵的內容。我一直在糾結於究竟哪種提取質粒DNA的方法最適閤我目前的研究。我看到市麵上有很多相關的書籍，但總覺得不夠詳盡，或者說，雖然原理講得很清楚，但實際操作中會遇到的一些小細節，比如緩衝液的配比、離心速度的具體設置、以及如何判斷DNA提取的質量和産量，這些信息卻語焉不詳。有時候，一個微小的操作失誤就可能導緻整個實驗前功盡棄，特彆是對於像我這樣剛開始接觸分子生物學實驗的學生來說，這種不確定性真的讓人很頭疼。我希望找到一本能夠詳細到每一步驟，甚至包括一些“秘訣”和“技巧”的書籍，能夠幫助我少走彎路，提高實驗的成功率。當然，我也很關注如何避免汙染，以及如何選擇閤適的試劑，這些都是影響實驗結果的關鍵因素。

評分☆☆☆☆☆

最近剛開始接觸基因剋隆，對如何高效地進行DNA片段的純化和連接感到有些力不從心。我瞭解到，不同來源的DNA（比如PCR産物、酶切片段）在純化方法上可能有所差異，而且純度直接影響後續連接反應的效率。我一直在尋找一本能夠係統性地介紹各種DNA純化技術，並對比其優缺點的書籍。特彆是關於瓊脂糖凝膠電泳分離DNA後的迴收方法，我希望這本書能提供詳細的步驟，以及一些可能遇到的問題和解決方案。比如，如何精確地切取目標條帶，如何選擇閤適的膠迴收試劑盒，以及如何評估迴收DNA的濃度和純度。另外，對於連接反應，我也希望能有更深入的講解，包括不同連接酶的選擇、反應體係的優化，以及如何判斷連接效率。