分子生物学实验方法与技巧 pdf epub mobi txt 电子书 下载 2025

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申煌煊 编

图书标签:

• 分子生物学
• 实验方法
• 生物技术
• 实验技巧
• 生命科学
• 生物化学
• 基因工程
• DNA/RNA
• 蛋白质
• 细胞生物学

出版社： 中山大学出版社

ISBN：9787306036780

版次：1

商品编码：10278513

包装：平装

开本：16开

出版时间：2010-06-01

用纸：胶版纸

页数：379

正文语种：中文

编辑推荐

《分子生物学实验方法与技巧》是实用型分子生物学相关实验方案的汇集。全书共分四部分二十三章，内容涉及DNA相关的操作，RNA相关的操作，蛋白质相关的操作以及细胞生物学相关的操作。无论对于经验丰富的研究者还是初学者，本书都能给予一定的启迪。

内容简介

不同于传统的相关图书，《分子生物学实验方法与技巧》主要介绍编写者们在近20年内进行分子生物学相关实验时，具体所采用的实验方案和技巧，是实用型实验方案的汇集。本书不求“新”：不追逐目前国际上的研究热点；也不求“全”：不是分子生物学的必备手册；只求“通”和“透”：每个实验均分为概述、实验方案（一套或根据其他条件而定的多套方案）、材料试剂（器皿和试剂等）、相关知识（背景知识、关键因素、时间安排、预期结果、参考文献）等四个方面的内容，力求将每一个实验讲透。无论对于经验丰富的研究者还是初学者，本书都能给予一定的启迪。

目录

第1章 实验前后的注意事项和行为准则
1.1 实验过程中的注意事项
1.1.1 实验前的注意事项
1.1.2 实验中的注意事项
1.1.3 实验后的注意事项
1.2 实验室成员的基本素质与行为准则
1.3 实验中的一些技巧及心得
1.3.1 提取高质量的RNA的技巧
1.3.2 细胞冻存及复苏
1.3.3 稳定转染后的检测方法
1.3.4 连接转化实验心得
1.3.5 Western B1ot
参考文献

第一部分 DNA相关的操作
第2章 质粒DNA的相关实验
2.1 质粒DNA的分离与纯化
2.1.1 概述
2.1.2 实验材料、仪器和试剂
2.1.3 实验原理、操作步骤和实验要点
2.2 DNA酶切与电泳分析
2.2.1 概述
2.2.2 实验材料、仪器和试剂
2.2.3 实验原理、操作步骤和实验要点
2.3 重组质粒的连接、转化及筛选
2.3.1 概述
2.3.2 实验材料、仪器和试剂
2.3.3 实验原理、操作步骤和实验要点
参考文献

第3章 聚合酶链式反应
3.1 标准PCR反应和扩增产物克隆
3.1.1 概述
3.1.2 实验材料、仪器和试剂
3.1.3 实验原理、操作步骤和实验要点
3.2 反转录PCR(RT-PCR)
3.2.1 概述
3.2.2 实验材料、仪器和试剂
3.2.3 实验原理、操作步骤和实验要点
3.3 出错PCR(致突变PCR)
3.3.1 概述
3.3.2 实验材料、仪器和试剂
3.3.3 实验原理、操作步骤和实验要点
3.4 基于重叠延伸PCR的DNA合成技术
3.4.1 概述
3.4.2 实验材料、仪器和试剂
3.4.3 实验原理、操作步骤和实验要点
参考文献

第4章 限制性内切酶的特性及应用
4.1 概述
4.2 实验方案
4.2.1 单限制性内切酶对单DNA样品的消化
4.2.2 消化多个DNA样品
4.2.3 多限制性内切酶消化DNA样品
4.2.4 限制性内切酶对DNA的部分消化
4.2.5 DNA的甲基化
4.3 相关知识
4.3.1 背景知识
4.3.2 关键因素
4.3.3 时间安排
4.3.4 预期结果
参考文献

第5章 基因组DNA的提取
5.1 动物组织基因组DNA的提取
5.1.1 概述
5.1.2 实验材料
5.1.3 实验步骤
5.1.4 关键因素
5.1.5 常见问题
5.1.6 所需时间
5.1.7 本节溶液配制
5.2 植物组织基因组DNA的提取
5.2.1 基本方案——氯化铯离心法
5.2.2 备选方案——CTAB法
5.3 人白细胞DNA的提取
5.3.1 概述
5.3.2 实验材料
5.3.3 实验步骤
5.3.4 关键因素
5.3.5 所需时间
5.4 DNA琼脂糖凝胶电泳及回收
5.4.1 琼脂糖凝胶分离：DNA
5.4.2 基本方案1——DNA电洗脱
5.4.3 基本方案2——NA-45纸电泳法
5.4.4 基本方案3——用低熔点琼脂糖凝胶分离DNA片段
5.4.5 备选方案l——使用B-琼脂糖酶从低熔点琼脂糖中回收DNA
5.4.6 备选方案2——用玻璃珠法从低熔点琼脂糖中回收DNA
5.4.7 本节溶液配制
5.5 非变性聚丙烯酰胺胶电泳及DNA回收
5.5.1 基本方案
5.5.2 备选方案——通过电洗脱从聚丙烯酰胺凝胶纯化片段
参考文献

第6章 分子探针及Southern杂交
6.1 探针的种类及其选择
6.1.1 探针的概念
6.1.2 探针的种类及其选择
6.2 探针标记物的种类及其选择
6.2.1 核素标记物
6.2.2 非放射性标记物
6.3 探针标记方法及其选择
6.3.1 双链DNA探针标记方法
6.3.2 单链DNA探针标记方法
6.3.3 末端标记DNA探针
6.3.4 寡核苷酸探针标记方法
6.3.5 RNA探针
6.4 探针的纯化
6.4.1 乙醇沉淀法
6.4.2 Sephadex G-50柱层析法
6.4.3 微柱离心法
6.5 Southern杂交
6.5.1 实验原理
6.5.2 基因组Southern Blot步骤
6.5.3 背景信息
6.5.4 关键参数
6.5.5 问题解决方法
6.5.6 预期结果
6.5.7 时间控制
6.5.8 优化方案
参考文献

第7章 基因组DNA的突变分析
7.1 概述
7.2 实验方案
7.2.1 PCR产物单链构象多态分析
7.2.2 PCR-异源双链构象分析法
7.2.3 PCR产物直接测序
7.2.4 PCR-限制性片段长度多态性分析
7.3 相关知识
7.3.1 背景知识
7.3.2 关键因素
7.3.3 时间安排
7.3.4 预期结果
参考文献

第二部分RNA相关的操作
第8章 RNA的提取和CDNA合成
8.1 概述
8.2 组织或细胞的总RNA提取

……
第9章 寻找差异表达基因方法——SSH法
第10章 全长基因的克隆——SMART技术
第11章 Northern Blot技术
第12章 siRNA的应用
第13章 RNA酶保护实验

第三部分 蛋白质相关的操作
第14章 蛋白质分离、鉴定相关技术
第15章 染色质免疫沉淀技术(ChIP)
第16章 蛋白复合体的分离与鉴定
第17章 免疫沉淀
第18章 免疫荧光染色技术

第四部分 细胞生物学相关的操作
第19章 外源基因在原核生物中的表达
第20章 外源基因在真核细胞中的表达
第21章 转基因植物
第22章 转基因动物技术
第23章 细胞凋亡的分子生物学检测方法
附录 分子生物学实验室安全及注意事项

精彩书摘

（1）要有基本的实验习惯，所有的记录必须清楚。要时刻清楚知道自己所做实验的一切，认真做好各项标记，怎么详细都不为过。笔者有一个朋友，不到30岁就成了耶鲁大学的助理教授，这对从事生物学研究的科研工作者来说是相当拔尖的（目前美国生物学的助理教授，绝大多数都接受过5～6年的博士教育和4年以上的博士后培养），他成功的秘笈之一就是有刻版印刷样的实验记录。
（2）实验中所用的试剂一定要专用，尽可能使用自己一个人所有的试剂。所有的试剂都自己配，出了问题才容易找原因。所有的东西都要即时标记好，新到的试剂应马上标明到达日期，这样能确保实验所用的试剂有效。所有配制的试剂都要标明三要素：药品名称、浓度、配制日期，同时还得标明配制者的名字、试剂的批号等。所有的实验用具都不要轻易用别人的；万一要用到时须先打招呼，且详细记录。第一次用到公共试剂时要注意质检，并注明相关的要素：配制时间、配制者、是否用过。要做好小离心管的标记，同时记录本上也应有相应详细情况的登记。重要的试剂须再加贴一张标签纸，用透明胶带贴在字的外面，以免在冰箱中反复冻融而使字迹模糊。
（3）认真做好实验的准备工作。实验前应认真设计，包括试剂、仪器的准备，实验方案的设计等。尽可能完备自己的实验方案。首先必须好好设计实验，做什么、怎么做都应该心里清楚。仔细查阅有关的文献资料，仔细分析、比较已有的多个相同或相似的实验方案，凭自己的专业知识选择其中的一个；同时向做过类似实验的人请教，他们对实验的感性与理性认识无疑是极有帮助的。仔细准备实验前的一切，争取一步到位。实验前最好做一份详尽的试验流程图并贴在试验台前，这是科研的“寻宝图”。需要特别注意的地方要特别标注，这样可以随时参照。有计划地安排时间，在有限的时间内有效地做更多的工作。
（4）尽量注意节约资源，保护环境。科学研究本身的消耗极大，同时又会给环境带来污染。因此，如果对其他实验没有什么大的影响的话，有些实验材料应尽可能回收利用，这样也能够减少对环境的污染，如PCR扩增用过的枪头完全可以用于EB电泳加样。
……

前言/序言

好的，这是一本关于古希腊哲学思想流变与实践的图书简介，力求内容详实，避免与您提到的《分子生物学实验方法与技巧》产生任何关联。 --- 沉思的群星：从米利都到亚历山大学派的古希腊思想探索 一部关于西方文明思想原点、逻辑构建与伦理实践的深度考察。 导言：思想的黎明与世界的追问 本书并非一部简单的历史编年，而是一次对古希腊哲学精神内核的溯源之旅。我们试图探寻的，是西方文明赖以建立的理性、逻辑与方法论的源头活水。从爱琴海边的城邦兴起到地中海霸权的更迭，哲学家们从未停止过对“世界本源”（Archē）的追问，以及对“良好生活”（Eudaimonia）的探求。 本书的叙事主线，围绕着三个核心轴线展开：本体论（Ontology）的建构、认识论（Epistemology）的革新，以及伦理学（Ethics）的实践。 我们将细致梳理，这些最初的哲学思考如何逐步演化为系统化的知识体系，并最终影响了后世的科学、政治与艺术。 第一部分：自然哲学的探索（约公元前 6 世纪 – 前 5 世纪初） 本部分聚焦于前苏格拉底时期，那群被称为“自然哲学家”（Physikoi logoi）的思想先驱。他们以惊人的洞察力，试图以理性（Logos）而非神话（Mythos）来解释宇宙的构成。 1. 米利都学派：水、气与数的原质 我们从爱奥尼亚（Ionia）开始，探讨泰勒斯（Thales）提出的“水是万物之源”这一划时代的观点。这不仅仅是一个物质性的假设，更是人类第一次尝试用单一、可观察的自然元素来统摄变幻莫测的宇宙。随后，阿那克西曼德（Anaximander）引入了“无限者”（Apeiron）的概念，这标志着对具体物质原质的超越，引入了更抽象的、具有形而上学意味的本体论维度。阿那克西梅尼（Anaximenes）则回归到“气”的形态，通过凝结与稀薄来解释物质的转化，展现了早期朴素的辩证思维。 2. 赫拉克利特与巴门尼德：运动与静止的永恒对立 本部分着重分析了公元前 5 世纪初，哲学思想中产生的第一次重大分野。 赫拉克利特（Heraclitus） 及其“万物流转”（Panta Rhei）的学说，强调“变”是世界的本质。他提出的“火”作为恒变的媒介，以及“对立面的一致性”，深刻地揭示了动态平衡的宇宙观。 巴门尼德（Parmenides） 及其埃利亚学派则构筑了一个截然相反的体系。他通过严密的逻辑推理证明：存在（Being）是唯一且永恒不变的，感官所见的运动和变化皆为幻象。这种对“不动之存在”的坚持，奠定了西方形而上学的基石，并直接挑战了常识。 3. 多元论的尝试：恩培多克勒与阿那萨戈拉 为了调和“永恒存在”与“感官变化”之间的矛盾，自然哲学家们转向了多元论。恩培多克勒（Empedocles）提出的“四根元素”（土、水、火、气）及其驱动力“爱”与“恨”，首次引入了作用力的概念。阿那萨戈拉（Anaxagoras）则提出了“种子”（Spermata）和“努斯”（Nous，心智/理性），将宇宙的秩序归因于一个外在的、具有组织能力的理性实体，这为后来的神学和宇宙论铺平了道路。 4. 德谟克利特的原子论：不可分割的实在 原子论的兴起是早期物理学的一次高峰。德谟克利特（Democritus）认为世界由“原子”（Atomos，不可分割之物）和“虚空”（Void）构成。原子在虚空中随机运动、结合与分离，解释了一切现象。原子论的贡献在于，它首次将物质世界彻底还原为数量和形态的机械运动，是一种彻底的唯物主义和决定论的尝试。 第二部分：智者学派与苏格拉底的转向（公元前 5 世纪） 随着城邦民主制度的成熟，焦点从宇宙的本源转向了人类自身、城邦的法律与德行。 1. 智者学派：相对主义与修辞学的崛起 本部分详细剖析了普罗泰戈拉（Protagoras）的“人是万物的尺度”如何引发认识论上的相对主义。智者们教授技艺（Technē），特别是修辞学，以帮助公民在政治辩论中获胜，这在客观上推动了思辨和批判性思维，但也引发了对客观真理是否存在之争。高尔吉亚（Gorgias）的虚无主义论断（“无物存在；即使存在，亦不可知；即使可知，亦不可传达”）将怀疑主义推向了极致。 2. 苏格拉底：德行即知识与助产术 苏格拉底（Socrates）对智者学派的商业化和相对主义进行了猛烈批判，他将哲学的目光坚定地引向伦理学和自我认知。 “未经审视的生活不值得过”：强调内省和灵魂的关怀。 “德行即知识”：认为邪恶源于无知，每个人都渴望善。 辩证法（Elenchus）：通过不断的诘问和反驳，揭示出对方认识中的矛盾，从而引导出更精确的定义，这是一种开创性的定义方法论。 第三部分：柏拉图与亚里士多德的集大成（公元前 4 世纪） 这一部分是本书的核心，考察了两位巨人如何系统地整合并超越了前人的思想成果，建立了影响西方两千年的哲学框架。 1. 柏拉图：理念世界与政治理想 柏拉图（Plato）对苏格拉底思想的继承与发展，最终导向了著名的“理念论”（Theory of Forms）。 二元论结构：身体（感官世界，变动不居）与灵魂（理念世界，永恒完美）。理念（如善、美、正义的理念）是事物的真正实在和知识的对象。 知识的攀登：通过“回忆说”（Anamnesis）解释了认识的本质——是对先验理念的唤醒。 政治哲学：在《理想国》中，柏拉图构建了一个基于理性和正义的城邦模型，由哲人王统治，将认识论（对“善的理念”的掌握）直接等同于最高的政治能力。 2. 亚里士多德：经验的沉思与逻辑的奠基 亚里士多德（Aristotle）是柏拉图的学生，但他采取了经验主义的回归，将哲学探究扎根于对具体事物的观察和分类。 形而上学（第一哲学）：对“存在者之所以存在”的研究，提出了质料（Matter）与形式（Form）的共存论，取代了柏拉图的“分离的理念世界”。 四因说：对事物存在的解释框架（质料因、形式因、动力因、目的因），是理解古代世界观的钥匙。 逻辑学的创立：亚里士多德首次系统化了三段论的推理规则，创建了形式逻辑的结构，其《工具论》成为西方理性思维的规范性指南。 伦理学与政治学：其《尼各马可伦理学》强调中道（Mesotes）和追求幸福（Eudaimonia）是人类的终极目的，将理论哲学与实践理性紧密结合。 第四部分：希腊化时期的精神避难所 亚历山大东征后，城邦衰落，哲学中心转移，人们的关注点从宏大的城邦正义转向了个人的心灵安宁。 1. 伊壁鸠鲁主义：宁静的愉悦 伊壁鸠鲁（Epicurus）主张，幸福在于“无痛苦的宁静”（Ataraxia）。他继承了原子论，认为灵魂由更精细的原子构成，死亡是原子解散，无需恐惧。他的伦理学是基于计算的享乐主义，但强调的最高快乐是心灵的平静，而非肉体的放纵。 2. 斯多葛主义：命运的接受与内在的自由 斯多葛学派（Stoicism）强调宇宙万物遵循逻各斯（Logos）的必然秩序。真正的自由在于认识并接受这一自然法则，培养“不动心”（Apatheia），即不对外界的偶然事件产生强烈的情感反应。他们将德行视为唯一的善，并倡导履行社会责任，这在罗马世界产生了深远影响。 3. 怀疑主义的终结与新柏拉图主义的展望 皮浪主义者（Pyrrhonism）将怀疑推向了极致，主张对所有命题保持悬置判断（Epochē），以获得心灵的平静。最终，普罗提诺（Plotinus）的新柏拉图主义将柏拉图的理念论神秘化和神化，提出了“太一”（The One）的流溢体系，为基督教和伊斯兰哲学提供了重要的形而上学框架。 结语：回响至今的理性遗产 本书试图证明，古希腊哲学并非僵死的历史遗迹，而是我们理解现代科学方法、政治理论乃至个人道德困境的活水源头。从对“世界本源”的追问，到对“完美形式”的构建，再到对“宁静心灵”的寻求，这些古老的思考，构成了西方理性文明最坚实的基石。 关键词： 米利都、赫拉克利特、巴门尼德、苏格拉底、柏拉图理念论、亚里士多德逻辑学、四因说、斯多葛主义、伊壁鸠鲁主义、形而上学、认识论。 ---

评分☆☆☆☆☆

我是一名对新技术充满好奇的研究者，尤其关注分子生物学领域的前沿进展。《分子生物学实验方法与技巧》这本书，我希望它能为我打开一扇了解最新技术的大门。现在分子生物学发展迅速，各种新型的实验技术层出不穷，比如单细胞测序、空间转录组学、以及各种新兴的标记和检测技术。我希望这本书能对这些技术有一个相对全面的介绍，包括它们的基本原理、适用范围、以及在实际研究中的应用案例。我不是要求它像专业的技术手册那样事无巨细，但我希望它能提供一个清晰的概览，让我了解这些技术的优势和局限性，知道它们能解决哪些现在我们难以解决的问题。此外，我还需要了解如何选择合适的技术来解决特定的研究问题。这本书能否提供一些关于技术选择的指导，比如在研究特定蛋白质的功能时，应该考虑哪些检测方法？在研究基因组变异时，又应该选择哪种测序技术？我希望这本书能帮助我拓宽视野，了解最新的技术趋势，并为我的未来研究方向提供一些新的思路和可能性。

评分☆☆☆☆☆

作为一名刚刚起步的博士生，我在实验设计和数据分析方面还处于摸索阶段。对于《分子生物学实验方法与技巧》，我最看重的是它在实验设计理念上的引导作用，以及如何将实验结果进行有效的解读和分析。例如，在设计一个涉及基因表达调控的实验时，我需要考虑对照组的设置、样本量的选择、以及如何选择最合适的检测手段。这本书能否提供一些关于实验设计原则的讨论，帮助我规避常见的误区？另外，在进行一些分子生物学实验时，我们常常会产生大量的原始数据，比如测序数据、芯片数据等。如何有效地对这些数据进行预处理、质控，以及使用合适的统计学方法进行分析，最终得出有意义的结论，这对我来说是相当大的挑战。我希望这本书能在这方面给出一些指导性的建议，即使不直接涉及复杂的生物信息学分析，也能提供一些基础的框架和思路，让我知道从何入手。我期待它能帮助我建立起一个更科学、更严谨的实验思维体系，不只是埋头做实验，更能理解实验的意义和价值。

评分☆☆☆☆☆

拿到这本书，我最关心的点在于它如何讲解那些我们常常在实验中遇到的“拦路虎”。比如，Western Blot，这个实验可以说是让无数新手头疼不已。条带模糊、背景高、信号弱，这些问题简直是家常便饭。我非常期待这本书能提供一些非常具体的、有针对性的解决方案。例如，在抗体选择和优化方面，有没有更详细的指导？关于封闭液的配方和封闭时间，有没有一些通用的建议，或者针对不同物种、不同抗原的优化策略？还有，显影步骤，化学发光底物的选择和用量，曝光时间的长短，这些都对结果至关重要。我希望书中能有详细的图文展示，甚至是一些视频链接（如果可能的话），来直观地展示操作过程中的关键细节。而且，除了Western Blot，我还想了解一下qPCR的稳定性问题。Ct值的波动，内参的选择，这些都是影响实验可靠性的重要因素。如果这本书能在这方面提供一些深入的解析和实用的技巧，那对我来说绝对是巨大的帮助。我希望它不仅仅是罗列步骤，而是能解释“为什么”要这样做，背后的原理是什么，这样我才能更好地理解和掌握。

评分☆☆☆☆☆

对于这本书，我特别关注那些能够显著提高实验效率和降低成本的“技巧”部分。我所在的研究方向对样本需求量很大，而且一些关键试剂的价格也不菲。因此，如何优化实验流程，减少不必要的消耗，是每个实验人员都在努力的方向。比如，在RNA提取方面，我希望这本书能介绍一些更高效、更经济的试剂盒选择，或者提供一些自己配制关键溶液的配方和方法。另外，在细胞培养和转染方面，如何提高转染效率，减少细胞毒性，如何有效保存细胞株，这些都是非常实际的问题。我希望书中能有一些关于“偷师学艺”的小窍门，比如一些前辈总结出来的操作经验，或者是一些非常规但有效的处理方法。我不太喜欢那些过于理论化、脱离实际的书籍，我更希望它能提供一些“接地气”的建议，能够直接应用到我的日常实验中，帮助我节省时间和金钱，同时又能保证实验的质量。如果书中能分享一些“踩坑”经验，并给出避免这些“坑”的技巧，那就更好了。

评分☆☆☆☆☆

《分子生物学实验方法与技巧》这本书，说实话，我刚拿到手的时候，心里还是挺期待的。我是一名研二的学生，在做毕业论文，主要的研究方向是基因沉默，所以对分子生物学实验方法和技巧的需求可以说是刚性的。我之前也零零散散地接触过一些相关的书籍和文献，但总觉得不够系统，不够深入。这本书的名字听起来就非常契合我的需求，我希望能通过它来梳理和巩固我的实验技能，尤其是在一些关键步骤上，比如RNA提取、RT-PCR、Western Blot等等，希望能找到一些更优化、更稳定的操作方法。我对书中的“技巧”部分尤其感兴趣，因为我知道，很多时候实验的成败就取决于一些细微的操作和经验，这些往往是教科书上难以详细描述的。我希望这本书能像一个经验丰富的导师一样，毫不保留地分享那些“秘籍”，让我少走弯路，提高实验的效率和成功率。当然，我也希望这本书能涵盖一些比较前沿的分子生物学技术，比如CRISPR/Cas9基因编辑在实验中的应用，或者一些新型的基因测序技术在实验设计中的考量。毕竟，科学研究是不断发展的，我也希望我的知识能够跟上时代的步伐。总的来说，我希望这本书能够给我带来系统性的指导，提供实用的解决方案，并激发我在实验设计和操作上的更多灵感。

评分☆☆☆☆☆

很不错

评分☆☆☆☆☆

这本书还是挺好的，讲解比较细致，就是逻辑性稍欠缺，给需要学习分生实验的同学看足够了。

评分☆☆☆☆☆

值得新手看看

评分☆☆☆☆☆

很不错的书！技巧较为详尽，感觉私人老师在教导你，值得购买

评分☆☆☆☆☆

给力，挺好的

评分☆☆☆☆☆

讲的很好

评分☆☆☆☆☆

挺不错的，看了一下，讲了很多具体的东西和方法，很好！！

评分☆☆☆☆☆

书的内容不错，但是有部分纸张黑乎乎的，不过不影响阅读

评分☆☆☆☆☆

质量不错