干细胞实验指南/生物学实验指南丛书 [Handbook： Stem Cell Biology] pdf epub mobi txt 电子书 下载 2025

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周琪，郝捷，王柳 编

图书标签:

• 干细胞
• 细胞生物学
• 实验技术
• 生物学
• 分子生物学
• 生物工程
• 实验室手册
• 研究方法
• 生命科学
• 医学

出版社： 中央广播电视大学出版社

ISBN：9787304071868

版次：1

商品编码：12085600

包装：平装

丛书名： 生物学实验指南丛书

外文名称：Handbook： Stem Cell Biology

开本：16开

出版时间：2015-07-01

用纸：胶版纸

页数：160

字数：354000

正文语种：中文

内容简介

　　《干细胞实验指南/生物学实验指南丛书》是进行干细胞研究的实验技术类书籍。干细胞研究日新月异，推出一本既能体现目前干细胞技术的水平，又对科研人员的具体实验操作有实际指导作用的图书是我们的初衷。对于实验室新人来说，《干细胞实验指南/生物学实验指南丛书》力求使他们能够迅速地了解干细胞实验所涉及的领域，省时省力地学会做实验。对于已有实验室工作经验的人来说，《干细胞实验指南/生物学实验指南丛书》力图扩展他们的视野。对于导师来说，《干细胞实验指南/生物学实验指南丛书》可部分替代他们对学生基本知识和实验技能的传授。对于生物仪器、试剂公司的业务人员来说，《干细胞实验指南/生物学实验指南丛书》可以使他们了解干细胞实验的基本需求，在推广产品时可以有针对性，表现出个人和公司的专业素养。

目录

第一章 干细胞概述
一、干细胞的定义与特性
二、干细胞的分类
三、干细胞的研究历史及热点
参考文献

第二章 干细胞培养技术概述
第一节 概述
一、细胞培养的优势
二、细胞培养的限制
三、细胞培养的应用
四、细胞培养的基本条件
五、细胞培养的无菌原则
六、细胞实验的注意事项
七、细胞培养液的成分及配制
第二节 干细胞常用培养方法
一、细胞培养方式
二、原代取材
三、传代培养
第三节 干细胞的冻存与复苏
一、细胞的冻存
二、细胞复苏的过程
第四节 细胞污染的检测与鉴定
一、细胞污染
二、细胞污染的预防
第五节 干细胞鉴定方法
一、细胞形态观察
二、核型分析
三、免疫组织化学荧光染色
四、分子水平分析
五、流式细胞分析
六、细胞弧群分析
七、绘制细胞增殖曲线
八、细胞凋亡检测

第三章 胚胎干细胞
第四章 诱导性多能干细胞
第五章 神经干细胞
第六章 造血干细胞
第七章 间充质干细胞
第八章 精原干细胞
第九章 干细胞实验室的建设
附录
索引

精彩书摘

　　《干细胞实验指南/生物学实验指南丛书》：
　　造血干细胞（HSCs）是迄今为止研究最为透彻的成体干细胞。1961年Till和McCulloch等在分析骨髓中负责血液再生的细胞时用了两个特征来定义HSCs（Till and McCulloch，1961），一是可以进行自我更新，二是可以产生所有血细胞类型。经过近50多年的研究，随着对HSCs的了解不断深入，HSCs可以从骨髓、脐带血和动员后的外周血中分离获得。HSCs较早应用于临床，用于治疗癌症、血液疾病以及一些免疫系统疾病。另外，HSCs还具有转分化成神经细胞、肌肉细胞以及肝细胞等细胞的能力（Wagersand Weissman，2004）。因此与其他成体干细胞相比，HSCs具有不可比拟的优势。
　　HSCs在体内需要保证机体血液供应、维持内环境稳态以及在紧急出血或机体受到损害的情况下快速产生大量成熟的血细胞，因此HSCs需具备以下功能（Morrison and Kimble，2006）：可自我更新或凋亡以维持自身的数量稳定；可迅速进入分化状态形成血细胞；可迁移至身体其他部位；可维持自身在骨髓中的内环境稳态。所以HSCs最主要的特征就是自我更新以及具有多向分化成所有血细胞类型的潜能。检验小鼠HSCs的黄金标准是把细胞注射到接受过一定射线照射后自身造血细胞被全部杀死的小鼠中，重建小鼠的造血系统。验证人HSCs的功能则需要将其移植到造血系统被射线破坏的非肥胖糖尿病／重症联合免疫缺陷小鼠（Nonobese Diabetic／Severle Combined Immunodeficient Mice，NOD／SCID小鼠， 即在SCID小鼠的基础上与NOD／Lt品系回交的免疫缺陷鼠）中，检测其是否能够恢复小鼠的造血功能（Blank et al.2008）。
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《分子生物学技术与实践》 本书介绍 《分子生物学技术与实践》是一本全面涵盖现代分子生物学核心技术与其实际操作流程的权威指南。本书旨在为生命科学领域的研究人员、高年级本科生和研究生提供一个深入、系统且实用的实验参考手册。我们深知，分子生物学是现代生物学研究的基石，其技术栈的熟练掌握程度直接决定了科研工作的深度与广度。因此，本书的设计核心在于“实践性”与“前沿性”的结合，确保读者不仅理解理论基础，更能熟练运用各种实验方法解决实际科研问题。 本书内容结构严谨，从基础的核酸提取、纯化，到复杂的基因克隆、表达调控分析，再到最新的高通量测序技术及生物信息学初步应用，构建了一个完整的分子生物学实验技术知识体系。全书共分为八个主要部分，涵盖了超过百种经典及前沿实验方法。 --- 第一部分：分子生物学基础技术与试剂制备 本部分是所有高级实验的起点。我们详细阐述了在无菌环境下进行所有操作的前提条件。 1.1 实验室安全与规范： 涵盖了生物安全等级（BSL-1至BSL-3）的区分、化学品安全操作规范（MSDS解读）、生物废弃物处理流程，以及个人防护装备（PPE）的正确使用方法。强调了交叉污染的预防策略，尤其是在进行敏感的PCR和细胞培养实验时。 1.2 缓冲液、培养基与试剂的配制： 提供了数百种常用缓冲液（如Tris-HCl, PBS, TAE, TBE, RIPA, NP-40 Lysis Buffer）的精确配方及配制步骤。重点讲解了pH值调节的技巧、过滤除菌（微孔滤膜的选择）以及分装与储存条件，确保试剂活性最大化。同时，详细列出了细菌和酵母菌标准培养基（LB, SOB, YPD）的详细配方及优化参数。 1.3 基础仪器操作与维护： 涵盖了离心机（从台式到超速离心机）、pH计、电泳仪、紫外分光光度计、振荡培养箱的日常操作、校准与简易故障排除。特别强调了如何通过测试确保设备的准确性。 --- 第二部分：核酸的提取、纯化与定量 核酸的质量是后续所有分子生物学实验成功的关键。本部分致力于提供针对不同样本类型（组织、细胞、血液、植物、微生物）的最佳提取方案。 2.1 DNA提取与纯化： 针对石蜡包埋组织（FFPE）、高黏度组织（如脑组织）和富含多糖的植物材料，提供了优化的裂解方案。详细对比了酚氯仿抽提法、硅胶柱纯化法和磁珠法的优缺点及适用场景。 2.2 RNA的提取与保护： 重点介绍了如何最大程度地保护RNA免受RNase降解。提供了Trizol法和商业试剂盒法的详细操作流程，并特别关注了从低拷贝细胞或新鲜组织中提取高质量总RNA的技巧，如使用RNase抑制剂和液氮研磨。 2.3 核酸的质量评估与定量： 深入讲解了使用紫外分光光度计（A260/A280, A260/A230比值解读）和琼脂糖凝胶电泳来评估核酸的纯度和完整性。详细介绍了使用荧光定量系统（如NanoDrop, Qubit）进行精确定量的标准曲线建立和数据分析。 --- 第三部分：PCR技术及其高级应用 聚合酶链式反应（PCR）是分子生物学的核心技术，本书对其进行了最详尽的阐述。 3.1 标准与实时荧光定量PCR (qPCR)： 详细解析了Taq酶的特性、引物设计原理（Tm值、发夹结构预测）和PCR反应体系的优化（Mg2+浓度、退火温度的确定）。qPCR部分深入讲解了SYBR Green和TaqMan探针法的原理、标准曲线的绘制、溶解曲线分析以及绝对定量与相对定量（ΔΔCt法）的计算流程。 3.2 反转录PCR (RT-PCR) 与逆转录定量PCR (RT-qPCR)： 区分了cDNA合成中一步法与两步法的优劣，并针对RNA的微量样本提供了高效率的cDNA合成方案。 3.3 各种变体PCR技术： 涵盖了高保真PCR（如使用Proofreading酶）、长片段PCR、Touchdown PCR、以及用于单细胞分析的微量PCR技术。 --- 第四部分：基因克隆与重组DNA技术 本部分是基因工程实验的“蓝图绘制”阶段，涉及质粒构建、外源基因的导入与表达。 4.1 限制性内切酶的应用： 提供了数十种常用限制酶的切割位点图谱、反应条件表，以及“平末端”和“粘性末端”的酶切策略。讲解了酶切产物的回收方法（凝胶回收与PCR产物纯化）。 4.2 连接反应与载体构建： 详细介绍了T4 DNA连接酶的催化原理，并重点对比了经典粘性末端连接、平末端连接、以及更高效的基于同源重组的克隆技术（如Gibson Assembly, In-Fusion）。 4.3 基因的稳定与筛选： 介绍了转化大肠杆菌的效率提升技巧（如热激法、电转化法）。重点阐述了抗性筛选、蓝白斑筛选体系的原理与操作细节。对于复杂的载体构建，提供了序列验证（Sanger测序）的结果解读方法。 --- 第五部分：蛋白质的表达、纯化与分析 从基因到功能性蛋白的转化是理解生命活动的关键。 5.1 原核与真核表达系统： 详细对比了BL21/pET系统（诱导表达）、酵母表达系统以及哺乳动物细胞（如HEK293T）瞬时转染表达的优缺点。重点讲解了如何通过优化诱导剂浓度、温度和表达时间来解决目标蛋白在原核系统中的表达不溶性问题。 5.2 亲和标签与蛋白纯化： 深入解析了最常用的标签（His-tag, GST, MBP）的特性，并详细指导了亲和层析柱（镍柱、谷胱甘肽柱）的平衡、上样、洗脱和再生流程。提供了洗脱液优化（如咪唑浓度梯度）的实用建议。 5.3 蛋白质的定量与检测： 介绍了Bradford法、BCA法和Lowry法的适用性。重点讲解了SDS-PAGE电泳的原理、胶的制备、上样标准以及Western Blotting（蛋白质免疫印迹）的完整流程，包括一抗/二抗的选择、封闭条件和显影方法的优化，以实现高灵敏度的目的蛋白检测。 --- 第六部分：核酸和蛋白质的互作研究技术 本部分聚焦于研究分子机器如何在细胞内协同工作。 6.1 酵母双杂交（Y2H）系统： 提供了构建诱饵（Bait）和猎物（Prey）载体的设计原则，以及筛选策略（营养缺陷型筛选）。重点讨论了假阳性结果的排除方法。 6.2 共免疫沉淀（Co-IP）： 详细说明了裂解缓冲液对蛋白复合物稳定性的影响，抗体选择的标准，以及在Western Blot中验证互作的信号模式分析。 6.3 DNA/RNA免疫沉淀（ChIP/RIP）： 提供了染色质免疫沉淀（ChIP）实验中交联、打断（超声或酶切）、免疫沉淀和DNA富集的全流程指导，特别关注了ChIP-qPCR的定量分析方法。 --- 第七部分：细胞生物学实验技术基础 分子生物学研究的最终目标常常落脚于细胞功能层面。 7.1 细胞系培养与传代： 涵盖了对哺乳动物细胞（贴壁与悬浮）的基础培养技术，包括无菌操作、培养基的筛选与优化（血清批次效应）、细胞计数（血球计数板与自动计数仪）及冻存复苏技术。 7.2 转染与稳定细胞株的建立： 对比了磷酸钙共沉淀法、脂质体介导转染和电穿孔法在不同细胞类型上的适用性。详细介绍了如何通过筛选药物（如嘌呤霉素、潮霉素）建立稳定表达细胞株的筛选方案。 7.3 细胞功能与形态学分析： 包括MTT/CCK-8法进行细胞活性测定、细胞凋亡的Annexin V-FITC染色流式细胞术分析、以及荧光显微镜下的免疫细胞化学（ICC）和免疫荧光（IF）技术，重点讲解了固定、通透、封闭和抗体孵育的步骤优化。 --- 第八部分：生物信息学初步与数据处理 现代分子生物学实验高度依赖数据分析。本书提供了一个实用的入门路径。 8.1 基因序列数据库检索： 介绍如何高效使用NCBI GenBank、UniProt等核心数据库进行序列查找、BLAST比对和同源性分析。 8.2 辅助软件应用： 推荐并简要介绍了用于引物设计（Primer3）、蛋白质结构预测（如使用在线工具）和电泳条带/印迹图像的定量分析软件，强调了原始数据处理的规范性。 --- 《分子生物学技术与实践》不仅是一本手册，更是一部实验方法学的“工具箱”。每一章均配有详细的“故障排除（Troubleshooting）”专栏，预设了实验中可能遇到的常见问题，并提供了基于经验的解决方案，旨在帮助读者绕开弯路，快速掌握前沿的分子生物学技术。本书的深度和广度确保了其能够成为实验室中不可或缺的案头参考书。

评分☆☆☆☆☆

我是一名即将毕业的博士生，正在为我的论文收集实验方法。在查找了大量的文献后，我偶然发现了这本《干细胞实验指南/生物学实验指南丛书》。老实说，我一开始对它并没有抱太高的期望，毕竟实验手册这种东西，很多时候只是列出一些流程，缺乏深度。但当我开始阅读这本书时，我被它所展现出的深度和广度深深吸引了。书中不仅包含了标准的干细胞培养和分化技术，还深入探讨了各种关键步骤背后的分子机制，以及如何利用先进的成像技术和基因编辑技术来研究干细胞的功能。我特别欣赏它在细胞系选择、诱导分化效率评估以及不同检测方法的比较分析等方面提供的详尽指导。这些内容对于我设计精密的实验方案，解读复杂的实验数据，以及撰写高质量的论文，都提供了宝贵的参考。这本书让我感觉，我不再是孤军奋战，而是有了一个强大的后盾，帮助我更有效地解决研究中遇到的各种挑战。

评分☆☆☆☆☆

这本《干细胞实验指南/生物学实验指南丛书》我真是太惊喜了！当我拿到它的时候，就被它沉甸甸的分量和精美的封面设计所吸引。我是一名刚入行的实验室研究员，对于干细胞领域充满了好奇，但又缺乏系统性的指导。以前，我都是零散地从各种期刊文章和在线论坛上搜集信息，费时费力不说，还经常会遇到实验操作上的瓶颈，不知道该如何规范地进行，更别提如何解读实验结果了。这本书简直像及时雨一样，让我眼前一亮。它的排版清晰，逻辑性很强，从最基础的干细胞培养技术，到复杂的定向分化诱导，再到各种下游的分子生物学检测方法，几乎涵盖了我所有可能会遇到的实验环节。而且，书中对于每个实验步骤的描述都非常详尽，配上了高质量的插图和流程图，这对于我这种需要手把手指导才能更好地理解和操作的人来说，简直是福音。我特别欣赏它对实验原理的深入浅出讲解，让我不再是机械地重复操作，而是能够理解为什么这样做，这样在遇到意外情况时，也能够更灵活地应对。这本书让我对干细胞研究充满了信心，感觉自己离掌握这项前沿技术又近了一大步。

评分☆☆☆☆☆

从一个资深研究者的角度来看，《干细胞实验指南/生物学实验指南丛书》是一部非常扎实的工具书。我参与干细胞研究已经有十几年了，见识过不少实验手册，但这本书在细节的严谨性和实用性上，确实做到了一个很高的水平。它不仅罗列了各种实验方法，更重要的是，它深入剖析了每种方法背后的生物学原理，以及潜在的注意事项和陷阱。例如，在关于细胞系建立的部分，书中详细解释了不同传代方式对细胞特性可能产生的影响，并提供了相应的监测策略，这一点对于保证实验数据的可靠性至关重要。而且，它还引用了大量近期发表的文献，能够帮助读者快速了解该领域的最新进展和技术趋势，这对于保持研究的前瞻性非常有益。我尤其喜欢书中关于质量控制和数据分析章节的阐述，这部分往往是许多研究者容易忽视但又至关重要的环节。它提供的详细指导，能够帮助我们避免重复的错误，更有效地解读和呈现研究结果。对于需要稳定、高质量干细胞研究的实验室来说，这本书无疑是不可或缺的参考。

评分☆☆☆☆☆

这本书的编排方式真是太值得称赞了！《干细胞实验指南/生物学实验指南丛书》的章节划分非常合理，每个部分都像是一个独立但又相互关联的模块。我最喜欢的是它在介绍每个实验技术时，都会先简要回顾相关的生物学概念，然后详细描述操作步骤，最后再进行结果分析和可能遇到的问题排除。这种结构清晰、逻辑严谨的设计，极大地提高了阅读效率。我常常会在进行某个实验之前，翻阅书中的相关章节，对照自己的操作，检查是否有遗漏或者不当之处。书中的图表也非常精美，很多图片都展示了细胞的真实形态，这对于我这种需要通过形态学来判断细胞状态的研究者来说，非常有参考价值。而且，书中还特别强调了实验的标准化和可重复性，这一点在生物学研究中尤为重要，能够帮助我们建立可靠的实验流程，减少实验误差。总而言之，这是一本能够让你“看得懂，做得到”的实验指南。

评分☆☆☆☆☆

作为一个对生物技术充满热情的跨专业学习者，《干细胞实验指南/生物学实验指南丛书》对我来说，简直是一扇通往未知世界的大门。我虽然不是科班出身，但一直对干细胞的再生医学潜力非常着迷，总想了解更多关于它们如何在实验室里被“掌控”和“运用”。这本书的语言风格非常友好，尽管涉及很多专业术语，但通过清晰的解释和图文并茂的展示，我竟然也能慢慢理解。特别是那些关于细胞分离、培养基配制、以及如何观察细胞形态变化的描述，让我感觉自己仿佛身临其境，能够想象出实验过程的每一个细节。它没有一开始就抛出过于复杂的概念，而是循序渐进，从最基础的生物学知识讲起，然后逐步引导我进入干细胞的奇妙世界。这本书让我觉得，即使没有深厚的生物学背景，只要有足够的好奇心和耐心，也能触碰到科学研究的前沿。它极大地激发了我继续深入学习的动力，让我看到了科学探索的无限可能。