分子克隆实验指南（原书第四版-中文翻译版）平装 上中下三册 冷泉港实验室 科学出版社 生命 pdf epub mobi txt 电子书 下载 2025

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店铺： 河南树人图书专营店

出版社： 科学出版社

ISBN：9787030519979

商品编码：25785713054

丛书名： 分子克隆实验指南(第四版)

出版时间：2017-03-01

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《生命科学研究的基石：分子克隆技术详解》 前言 在生命科学蓬勃发展的浪潮中，分子克隆技术无疑扮演着核心驱动力的角色。它如同一把神奇的钥匙，为我们打开了认识生命物质基础的大门，让我们得以窥探基因的奥秘，揭示蛋白质的结构与功能，并最终应用于疾病的诊断与治疗、农作物的改良以及新药的研发等诸多领域。本书旨在为广大生命科学研究者，尤其是初学者，提供一套全面、系统且极具实践指导意义的分子克隆实验指南。我们力求在内容编排上循序渐进，理论与实践相结合，既能帮助读者建立扎实的理论基础，又能掌握精湛的实验操作技巧。 第一篇：分子克隆的基础理论与核心技术 在深入探讨具体实验操作之前，理解分子克隆背后的基本原理至关重要。本篇将系统梳理分子克隆涉及的关键概念，为后续的实验学习奠定坚实基础。 第一章：基因与基因组 基因的定义与功能： 我们将从生命的蓝图——DNA出发，详细阐述基因作为遗传信息单位的本质。基因编码着蛋白质或功能性RNA分子，它们是生命活动的执行者。本章将深入解析基因的结构，包括外显子、内含子、启动子、增强子等关键区域，以及它们如何协同作用，精确调控基因的表达。 基因组的组织与结构： 了解基因如何排列组合，构成完整的基因组，是理解分子克隆的另一个重要维度。我们将介绍原核生物和真核生物基因组在结构上的差异，例如染色体的组成、DNA的复制与修复机制，以及非编码RNA等重要组成部分的意义。 基因表达的调控： 基因的“开”与“关”，以及其表达水平的精细调控，是生命活动有序进行的关键。本章将重点介绍转录、翻译、转录后修饰以及蛋白质翻译后修饰等一系列复杂的调控过程，并讨论阻遏蛋白、激活蛋白、转录因子等调控元件在其中的作用。 基因组学与后基因组时代： 随着基因测序技术的飞速发展，我们已经进入了后基因组时代。本章将简要介绍基因组学研究的进展，以及基因组信息如何被应用于理解基因功能、疾病机制以及进化过程。 第二章：分子克隆的核心工具 限制性内切酶： 限制性内切酶是分子克隆的“剪刀”，它们能够特异性地识别并切割DNA的特定序列。本章将详细介绍限制性内切酶的种类、切割模式（粘性末端与平末端），以及它们在DNA片段化和连接中的关键作用。我们将提供识别和选择合适限制性内切酶的指导。 载体： 载体是DNA片段的“搬运工”，它们能够将外源DNA引入宿主细胞并进行复制。本章将重点介绍几种常见的载体类型，包括质粒、噬菌体、病毒载体以及人工染色体。我们将深入探讨它们的结构特点、复制方式、选择标记以及在不同应用场景下的选择依据。 DNA连接酶： DNA连接酶是分子克隆的“胶水”，它能够将两个DNA片段的磷酸二酯键连接起来，形成完整的DNA分子。本章将介绍DNA连接酶的作用机制，并讨论其在连接DNA片段、构建重组DNA分子时的重要性。 聚合酶链式反应（PCR）技术： PCR技术是分子克隆中不可或缺的DNA扩增工具，能够以指数级速度复制目标DNA片段。本章将详细阐述PCR的反应原理，包括DNA变性、退火和延伸三个基本步骤，以及引物、dNTPs、Taq酶等关键组分的选择与优化。我们将介绍各种PCR的变体，如逆转录PCR（RT-PCR）、实时定量PCR（qPCR）等，并讨论它们在基因表达分析、基因分型等方面的应用。 核酸提取与纯化： 无论是用于PCR、酶切还是测序，高质量的DNA或RNA模板是实验成功的先决条件。本章将介绍几种常用的核酸提取和纯化方法，包括酚-氯仿抽提法、柱层析法等，并提供优化实验步骤和评估核酸质量的建议。 第三章：分子克隆的基本策略与流程 基因的获取： 如何获得目标基因是分子克隆的第一步。本章将介绍几种获取基因的方法，包括从基因组DNA中酶切获得、通过RT-PCR从mRNA反转录合成cDNA，以及通过人工合成基因。 重组DNA分子的构建： 将目标基因插入到载体中，是分子克隆的核心过程。本章将详细介绍如何利用限制性内切酶和DNA连接酶，将目标基因定向插入到酶切后的载体中，构建重组质粒或其他重组载体。我们将强调同源末端连接（Ligation）和重组酶介导的定向克隆等不同连接策略。 重组DNA分子的转化与筛选： 构建好的重组DNA分子需要被引入宿主细胞（如大肠杆菌、酵母等）进行复制和表达。本章将介绍几种常用的转化方法，如热激法、电穿孔法等，并重点阐述如何利用选择标记（如抗生素抗性基因）和分子生物学技术（如蓝白斑筛选、PCR鉴定）来筛选出含有正确重组DNA分子的转化子。 基因组文库和cDNA文库的构建与筛选： 在研究未知基因组或特定组织基因表达时，构建基因组文库或cDNA文库是常用的方法。本章将介绍如何利用噬菌体或质粒作为载体，将大量的DNA片段插入其中，构建成文库，并详细阐述如何利用探针杂交、PCR等技术从文库中筛选出目标基因。 第二篇：分子克隆的进阶技术与应用 在掌握了分子克隆的基本原理和操作后，本篇将深入探讨更复杂的分子克隆技术，以及它们在生命科学研究中的广泛应用。 第四章：基因表达与调控研究 基因表达水平的检测： 了解基因在不同条件下的表达情况，是研究基因功能和调控机制的关键。本章将详细介绍多种基因表达检测方法，包括Northern Blot、RT-PCR、qPCR以及基因芯片技术，并分析它们的优缺点和适用范围。 蛋白质表达与鉴定： 基因最终通过翻译产生蛋白质，因此研究蛋白质的表达和功能同样重要。本章将介绍如何利用重组DNA技术在大肠杆菌、酵母、昆虫细胞或哺乳动物细胞等系统中过量表达目标蛋白，以及如何利用SDS-PAGE、Western Blot、质谱等技术对表达的蛋白质进行鉴定和分析。 启动子和增强子的鉴定与功能分析： 基因的表达受到其上游调控元件的精确控制。本章将介绍如何利用报告基因系统（如荧光蛋白、酶活性报告基因）来鉴定和分析基因的启动子和增强子的活性，以及它们在基因表达调控中的作用。 基因敲除与基因敲低技术： 通过“关闭”特定基因的表达，可以研究该基因在生命过程中的功能。本章将介绍基因敲除（如CRISPR/Cas9系统）和基因敲低（如RNAi技术）等策略，并讨论它们在研究基因功能、构建疾病模型等方面的应用。 第五章：基因功能分析与修饰 点突变与插入/缺失突变的构建： 通过在特定位点引入突变，可以研究单个核苷酸或小片段DNA改变对基因功能的影响。本章将介绍如何利用定点突变技术，精确地在目标基因上引入点突变、插入或缺失，从而研究其对蛋白质结构、功能或相互作用的影响。 融合蛋白的表达与应用： 将目标蛋白与其他蛋白（如荧光蛋白、标签蛋白）进行融合表达，有助于研究目标蛋白的定位、相互作用以及纯化。本章将介绍构建融合蛋白的策略，并列举荧光蛋白标记、GST融合蛋白、His标签融合蛋白等在研究中的应用实例。 蛋白质-蛋白质相互作用的研究： 蛋白质在细胞内并非孤立存在，它们通过相互作用协同完成各种生命活动。本章将介绍多种研究蛋白质相互作用的技术，如酵母双杂交（Y2H）、蛋白质免疫共沉淀（Co-IP）、互作分析（Far-Western Blot）以及表面等离子共振（SPR）等，并讨论它们在解析细胞信号通路、构建蛋白质复合物等方面的应用。 基因定向插入与基因编辑技术： 对于在特定位点精确引入基因或进行基因组改造，基因编辑技术提供了强大的工具。本章将深入介绍CRISPR/Cas9、TALENs、ZFNs等基因编辑系统的原理和应用，以及它们在基因治疗、疾病模型构建等前沿领域所展现出的巨大潜力。 第六章：分子克隆在生物技术中的应用 基因工程药物的开发： 许多重要的治疗性蛋白药物，如胰岛素、生长激素、干扰素等，都是通过分子克隆技术在大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞中生产的。本章将介绍基因工程药物的开发流程，包括基因的获取、表达载体的构建、宿主细胞的选择、表达产物的纯化和鉴定等。 转基因动植物的构建与应用： 将外源基因导入动植物中，可以赋予它们新的性状，例如抗虫、抗病、提高产量或改良品质。本章将介绍构建转基因动植物的技术，并探讨其在农业生产、生物医药等领域的重要应用，同时也会提及相关的伦理与安全问题。 基因治疗的原理与进展： 基因治疗旨在通过引入、修复或替换异常基因来治疗疾病。本章将介绍基因治疗的基本原理，包括基因递送载体（如病毒载体、非病毒载体）的选择，以及基因编辑技术在基因治疗中的潜在应用。我们将回顾基因治疗在某些遗传性疾病和癌症治疗中的临床试验进展。 合成生物学与基因线路的设计： 合成生物学致力于设计和构建具有新功能的生物部件、设备和系统。本章将介绍如何利用分子克隆技术，设计和构建复杂的基因线路，从而赋予微生物新的代谢通路或调控功能，为生物制造、环境修复等领域带来新的机遇。 第三篇：实验操作详解与问题排查 理论学习最终要落脚于实践。本篇将提供详细的实验操作步骤，并针对实验中可能遇到的常见问题，提供系统性的排查和解决方案，帮助读者顺利完成分子克隆实验。 第七章：常用分子克隆实验操作规程 DNA的酶切与琼脂糖凝胶电泳： 详细介绍限制性内切酶反应的最佳条件，以及如何通过琼脂糖凝胶电泳分离和鉴定DNA片段。我们将提供不同浓度凝胶的选择指导，以及电泳槽的正确搭建与使用。 DNA连接反应： 详细介绍DNA连接酶反应的优化条件，包括底物浓度、反应时间、温度等，并提供不同DNA片段连接的成功经验。 大肠杆菌转化： 分步介绍热激法和电穿孔法转化大肠杆菌的详细操作步骤，包括感受态细胞的制备、转化条件的优化以及转化效率的评估。 菌落PCR鉴定： 介绍如何利用菌落PCR快速鉴定重组质粒，包括引物的选择、PCR反应条件的优化以及结果的判读。 质粒DNA的提取与纯化： 提供从小量到大量质粒DNA提取的详细方法，包括碱裂解法和硅柱法，并介绍如何使用分光光度计和凝胶电泳评估质粒DNA的浓度和纯度。 PCR产物的回收与纯化： 详细介绍琼脂糖凝胶电泳提取PCR产物和硅柱法回收PCR产物的操作步骤。 DNA测序的应用与结果解读： 简要介绍Sanger测序和高通量测序的基本原理，以及如何利用测序结果验证克隆的准确性，并解读可能出现的突变或嵌合体。 第八章：实验过程中常见问题分析与解决 酶切效率不高或不完全： 分析可能导致酶切效率低下的原因，如酶的活性、底物DNA的质量、反应条件不当等，并给出相应的解决方案，例如更换酶、优化反应条件、增加酶量等。 连接效率低下或无连接产物： 探讨影响DNA连接效率的因素，如DNA片段浓度、末端互补性、连接酶活性、反应时间等，并提供优化建议，例如提高DNA浓度、延长反应时间、使用退火处理等。 转化效率低： 分析转化效率低下的原因，包括感受态细胞的质量、转化方法的选择、抗生素筛选条件的设定等，并提供提高转化效率的策略。 菌落PCR鉴定假阳性或假阴性： 解释可能导致菌落PCR鉴定出现错误的原因，如引物设计不当、PCR条件不合适、污染等，并提供纠正措施。 质粒提取物DNA降解或纯度不高： 分析DNA降解的原因，如核酸酶污染、操作不当等，以及纯度不高对后续实验的影响，并提供提高DNA质量的建议。 PCR扩增无产物或出现非特异性条带： 详细分析PCR扩增失败的常见原因，如模板DNA质量差、引物设计不当、退火温度不适宜、dNTPs浓度不当等，并给出相应的优化方案。 实验结果重复性差： 探讨影响实验重复性的因素，如试剂的质量、操作的规范性、环境因素等，并强调标准化操作和记录的重要性。 结语 分子克隆技术是理解和改造生命体最强大的工具之一。本书的编写，力求将复杂的技术原理和精细的实验操作融会贯通，希望能够成为您在分子克隆领域探索过程中可靠的助手。生命科学的研究是一场永无止境的探索，愿您在掌握了这些基础知识和技能之后，能够在此基础上不断创新，为生命科学的进步贡献自己的力量。 附录（未在正文中详细展开，但包含在图书整体内容中） 常用分子生物学试剂的保存与使用指南 分子生物学常用术语汇编 实验记录的规范与重要性 数据分析与图表绘制的建议

评分☆☆☆☆☆

作为一名实验室的资深研究员，我见证了分子克隆技术的发展和演变，手中也积累了不少相关的书籍。而这套《分子克隆实验指南》（中文翻译版，冷泉港实验室出品，科学出版社发行，平装三册）绝对是其中最值得称道的一本。它的内容深度和广度都达到了一个令人惊叹的水平。书中不仅涵盖了经典的分子克隆技术，还及时更新了近些年发展迅速的新技术，如CRISPR-Cas9基因编辑等，这对于保持研究的前沿性至关重要。对于我来说，这本书最大的价值在于它提供的“故障排除”指南。实验中总会遇到各种预料之外的问题，而这本书中对各种常见问题及其解决方案的详细分析，能够极大地节省我摸索的时间，避免不必要的重复劳动。此外，书中对实验设计的讨论也非常有见地，它不仅仅是提供操作流程，更是在引导读者如何从科学问题的本质出发，设计出高效、可靠的实验方案。我尤其喜欢书中关于数据分析和结果解读的部分，这对于最终得出有意义的结论至关重要。这套书，我敢说，绝对是分子克隆领域研究者的案头必备。

评分☆☆☆☆☆

这套《分子克隆实验指南》的平装版本，着实让我对分子克隆这门技术有了全新的认识。我一直认为它是一门高深的学问，但读了这本书后，发现它也可以变得如此易于理解和实践。书的装帧虽然是平装，但纸张的质量很好，印刷清晰，阅读起来非常舒适。上下中三册的配置，也保证了内容的完整性和系统的性。从基础概念到复杂的实验技术，这本书都进行了详尽的阐述。我最喜欢的部分是书中对各种实验技术的原理进行的深入剖析，它不仅仅是教你如何一步步操作，更重要的是让你理解每一步操作背后的科学原理，这样才能在遇到问题时，自己找到解决的办法。而且，书中提供了大量的实验案例，这些案例都非常贴近实际研究，让我能够更直观地理解书中的内容。我特别欣赏书中关于安全操作和伦理规范的说明，这对于实验室工作来说是至关重要的。我已经迫不及待地想将书中的知识应用到我的实验中，我相信这套书一定会成为我实验室研究的得力助手。

评分☆☆☆☆☆

这套《分子克隆实验指南》绝对是我近年来阅读过的最“有用”的书籍之一。作为一名科研工作者，我深知一本高质量的实验手册对于研究进展的重要性。这套书，平装三册，内容扎实，足以应对各种复杂的分子克隆实验需求。它的编排方式非常人性化，不仅有详尽的操作步骤，更深入地解释了每一步背后的生化原理和可能遇到的问题。我曾经在某个关键步骤上卡了很久，翻阅这套书的相应章节后，茅塞顿开，不仅解决了当下问题，还对整个实验有了更深刻的理解。书中的案例分析也非常实用，涵盖了基因克隆、基因表达、蛋白质互作等多个领域，能够帮助我将理论知识与实际操作相结合。而且，翻译的版本质量非常高，术语准确，语言流畅，读起来没有任何障碍，这对于理解复杂的生物化学概念至关重要。我特别欣赏书中对于实验设计的讨论，它教会我如何根据研究目标设计出最优的实验方案，如何进行对照实验，以及如何解释实验结果。这已经超越了一本操作手册的范畴，更像是一部分子克隆领域的“百科全书”和“智慧宝典”。我非常期待用这本书指导我的下一步研究，我相信它会极大地提升我的实验效率和研究水平。

评分☆☆☆☆☆

一本真正能够引领我深入分子克隆世界的宝典！我拿到这套书的时候，简直像发现了失落的宝藏。书的装帧非常精美，即使是平装，拿在手里也很有质感。上下中三册的厚度，足以说明其内容的丰富和翔实。冷泉港实验室的名字本身就代表着权威，科学出版社的翻译质量更是让我安心。翻开第一页，扑面而来的是严谨的科学态度和清晰的逻辑。即使是对于我这样刚入门的读者，也能感受到作者的良苦用心。每一章节的编排都循序渐进，从基础概念的介绍，到各种常用技术的详解，再到实验设计的思路和疑难解答，几乎涵盖了分子克隆领域的所有重要方面。我特别喜欢书中对实验原理的阐述，总能让我理解“为什么”这样做，而不是仅仅停留在“怎么做”。插图和图表的运用也恰到好处，将复杂的流程和结果可视化，大大减轻了阅读的负担。而且，这本书不仅仅是教你操作，更重要的是培养你的科学思维和解决问题的能力。它就像一位经验丰富、耐心细致的导师，随时在我身边指导，让我少走了许多弯路。我迫不及待地想要开始我的实验，相信这套书一定会成为我实验室里不可或缺的伙伴。

评分☆☆☆☆☆

坦白说，我之前对分子克隆技术一直有些模糊的概念，总觉得它很神秘，操作也很复杂。然而，当我拿到这套《分子克隆实验指南》（平装，中下上三册）后，这种感觉瞬间烟消云散。这本书就像一把钥匙，为我打开了通往分子克隆世界的大门。它的内容之详尽，让我感到惊喜。从最基础的酶切、连接，到复杂的基因编辑、文库构建，几乎囊括了分子克隆的方方面面。书中对于每一个实验步骤的描述都极为细致，甚至连试剂的准备、仪器的操作都考虑到了。最重要的是，它不仅仅告诉你“怎么做”，还会告诉你“为什么这么做”，解释了各种反应的机理，以及不同条件下操作可能产生的影响。这对于我这样的初学者来说，简直是福音。我曾经尝试过一些网上的教程，但总感觉碎片化，不够系统。而这套书，条理清晰，逻辑性强，让我能够建立起一个完整的知识体系。插图也非常生动形象，帮助我更好地理解那些抽象的概念。我已经迫不及待地想动手实践了，我相信这套书能够帮助我克服初期的困难，顺利完成我的实验项目。