分子剋隆實驗指南（原書第四版-中文翻譯版）平裝 上中下三冊 冷泉港實驗室 科學齣版社 生命 pdf epub mobi txt 電子書 下載 2025

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店鋪： 河南樹人圖書專營店

齣版社： 科學齣版社

ISBN：9787030519979

商品編碼：25785713054

叢書名： 分子剋隆實驗指南(第四版)

齣版時間：2017-03-01

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《生命科學研究的基石：分子剋隆技術詳解》 前言 在生命科學蓬勃發展的浪潮中，分子剋隆技術無疑扮演著核心驅動力的角色。它如同一把神奇的鑰匙，為我們打開瞭認識生命物質基礎的大門，讓我們得以窺探基因的奧秘，揭示蛋白質的結構與功能，並最終應用於疾病的診斷與治療、農作物的改良以及新藥的研發等諸多領域。本書旨在為廣大生命科學研究者，尤其是初學者，提供一套全麵、係統且極具實踐指導意義的分子剋隆實驗指南。我們力求在內容編排上循序漸進，理論與實踐相結閤，既能幫助讀者建立紮實的理論基礎，又能掌握精湛的實驗操作技巧。 第一篇：分子剋隆的基礎理論與核心技術 在深入探討具體實驗操作之前，理解分子剋隆背後的基本原理至關重要。本篇將係統梳理分子剋隆涉及的關鍵概念，為後續的實驗學習奠定堅實基礎。 第一章：基因與基因組 基因的定義與功能： 我們將從生命的藍圖——DNA齣發，詳細闡述基因作為遺傳信息單位的本質。基因編碼著蛋白質或功能性RNA分子，它們是生命活動的執行者。本章將深入解析基因的結構，包括外顯子、內含子、啓動子、增強子等關鍵區域，以及它們如何協同作用，精確調控基因的錶達。 基因組的組織與結構： 瞭解基因如何排列組閤，構成完整的基因組，是理解分子剋隆的另一個重要維度。我們將介紹原核生物和真核生物基因組在結構上的差異，例如染色體的組成、DNA的復製與修復機製，以及非編碼RNA等重要組成部分的意義。 基因錶達的調控： 基因的“開”與“關”，以及其錶達水平的精細調控，是生命活動有序進行的關鍵。本章將重點介紹轉錄、翻譯、轉錄後修飾以及蛋白質翻譯後修飾等一係列復雜的調控過程，並討論阻遏蛋白、激活蛋白、轉錄因子等調控元件在其中的作用。 基因組學與後基因組時代： 隨著基因測序技術的飛速發展，我們已經進入瞭後基因組時代。本章將簡要介紹基因組學研究的進展，以及基因組信息如何被應用於理解基因功能、疾病機製以及進化過程。 第二章：分子剋隆的核心工具 限製性內切酶： 限製性內切酶是分子剋隆的“剪刀”，它們能夠特異性地識彆並切割DNA的特定序列。本章將詳細介紹限製性內切酶的種類、切割模式（粘性末端與平末端），以及它們在DNA片段化和連接中的關鍵作用。我們將提供識彆和選擇閤適限製性內切酶的指導。 載體： 載體是DNA片段的“搬運工”，它們能夠將外源DNA引入宿主細胞並進行復製。本章將重點介紹幾種常見的載體類型，包括質粒、噬菌體、病毒載體以及人工染色體。我們將深入探討它們的結構特點、復製方式、選擇標記以及在不同應用場景下的選擇依據。 DNA連接酶： DNA連接酶是分子剋隆的“膠水”，它能夠將兩個DNA片段的磷酸二酯鍵連接起來，形成完整的DNA分子。本章將介紹DNA連接酶的作用機製，並討論其在連接DNA片段、構建重組DNA分子時的重要性。 聚閤酶鏈式反應（PCR）技術： PCR技術是分子剋隆中不可或缺的DNA擴增工具，能夠以指數級速度復製目標DNA片段。本章將詳細闡述PCR的反應原理，包括DNA變性、退火和延伸三個基本步驟，以及引物、dNTPs、Taq酶等關鍵組分的選擇與優化。我們將介紹各種PCR的變體，如逆轉錄PCR（RT-PCR）、實時定量PCR（qPCR）等，並討論它們在基因錶達分析、基因分型等方麵的應用。 核酸提取與純化： 無論是用於PCR、酶切還是測序，高質量的DNA或RNA模闆是實驗成功的先決條件。本章將介紹幾種常用的核酸提取和純化方法，包括酚-氯仿抽提法、柱層析法等，並提供優化實驗步驟和評估核酸質量的建議。 第三章：分子剋隆的基本策略與流程 基因的獲取： 如何獲得目標基因是分子剋隆的第一步。本章將介紹幾種獲取基因的方法，包括從基因組DNA中酶切獲得、通過RT-PCR從mRNA反轉錄閤成cDNA，以及通過人工閤成基因。 重組DNA分子的構建： 將目標基因插入到載體中，是分子剋隆的核心過程。本章將詳細介紹如何利用限製性內切酶和DNA連接酶，將目標基因定嚮插入到酶切後的載體中，構建重組質粒或其他重組載體。我們將強調同源末端連接（Ligation）和重組酶介導的定嚮剋隆等不同連接策略。 重組DNA分子的轉化與篩選： 構建好的重組DNA分子需要被引入宿主細胞（如大腸杆菌、酵母等）進行復製和錶達。本章將介紹幾種常用的轉化方法，如熱激法、電穿孔法等，並重點闡述如何利用選擇標記（如抗生素抗性基因）和分子生物學技術（如藍白斑篩選、PCR鑒定）來篩選齣含有正確重組DNA分子的轉化子。 基因組文庫和cDNA文庫的構建與篩選： 在研究未知基因組或特定組織基因錶達時，構建基因組文庫或cDNA文庫是常用的方法。本章將介紹如何利用噬菌體或質粒作為載體，將大量的DNA片段插入其中，構建成文庫，並詳細闡述如何利用探針雜交、PCR等技術從文庫中篩選齣目標基因。 第二篇：分子剋隆的進階技術與應用 在掌握瞭分子剋隆的基本原理和操作後，本篇將深入探討更復雜的分子剋隆技術，以及它們在生命科學研究中的廣泛應用。 第四章：基因錶達與調控研究 基因錶達水平的檢測： 瞭解基因在不同條件下的錶達情況，是研究基因功能和調控機製的關鍵。本章將詳細介紹多種基因錶達檢測方法，包括Northern Blot、RT-PCR、qPCR以及基因芯片技術，並分析它們的優缺點和適用範圍。 蛋白質錶達與鑒定： 基因最終通過翻譯産生蛋白質，因此研究蛋白質的錶達和功能同樣重要。本章將介紹如何利用重組DNA技術在大腸杆菌、酵母、昆蟲細胞或哺乳動物細胞等係統中過量錶達目標蛋白，以及如何利用SDS-PAGE、Western Blot、質譜等技術對錶達的蛋白質進行鑒定和分析。 啓動子和增強子的鑒定與功能分析： 基因的錶達受到其上遊調控元件的精確控製。本章將介紹如何利用報告基因係統（如熒光蛋白、酶活性報告基因）來鑒定和分析基因的啓動子和增強子的活性，以及它們在基因錶達調控中的作用。 基因敲除與基因敲低技術： 通過“關閉”特定基因的錶達，可以研究該基因在生命過程中的功能。本章將介紹基因敲除（如CRISPR/Cas9係統）和基因敲低（如RNAi技術）等策略，並討論它們在研究基因功能、構建疾病模型等方麵的應用。 第五章：基因功能分析與修飾 點突變與插入/缺失突變的構建： 通過在特定位點引入突變，可以研究單個核苷酸或小片段DNA改變對基因功能的影響。本章將介紹如何利用定點突變技術，精確地在目標基因上引入點突變、插入或缺失，從而研究其對蛋白質結構、功能或相互作用的影響。 融閤蛋白的錶達與應用： 將目標蛋白與其他蛋白（如熒光蛋白、標簽蛋白）進行融閤錶達，有助於研究目標蛋白的定位、相互作用以及純化。本章將介紹構建融閤蛋白的策略，並列舉熒光蛋白標記、GST融閤蛋白、His標簽融閤蛋白等在研究中的應用實例。 蛋白質-蛋白質相互作用的研究： 蛋白質在細胞內並非孤立存在，它們通過相互作用協同完成各種生命活動。本章將介紹多種研究蛋白質相互作用的技術，如酵母雙雜交（Y2H）、蛋白質免疫共沉澱（Co-IP）、互作分析（Far-Western Blot）以及錶麵等離子共振（SPR）等，並討論它們在解析細胞信號通路、構建蛋白質復閤物等方麵的應用。 基因定嚮插入與基因編輯技術： 對於在特定位點精確引入基因或進行基因組改造，基因編輯技術提供瞭強大的工具。本章將深入介紹CRISPR/Cas9、TALENs、ZFNs等基因編輯係統的原理和應用，以及它們在基因治療、疾病模型構建等前沿領域所展現齣的巨大潛力。 第六章：分子剋隆在生物技術中的應用 基因工程藥物的開發： 許多重要的治療性蛋白藥物，如胰島素、生長激素、乾擾素等，都是通過分子剋隆技術在大腸杆菌、酵母或哺乳動物細胞中生産的。本章將介紹基因工程藥物的開發流程，包括基因的獲取、錶達載體的構建、宿主細胞的選擇、錶達産物的純化和鑒定等。 轉基因動植物的構建與應用： 將外源基因導入動植物中，可以賦予它們新的性狀，例如抗蟲、抗病、提高産量或改良品質。本章將介紹構建轉基因動植物的技術，並探討其在農業生産、生物醫藥等領域的重要應用，同時也會提及相關的倫理與安全問題。 基因治療的原理與進展： 基因治療旨在通過引入、修復或替換異常基因來治療疾病。本章將介紹基因治療的基本原理，包括基因遞送載體（如病毒載體、非病毒載體）的選擇，以及基因編輯技術在基因治療中的潛在應用。我們將迴顧基因治療在某些遺傳性疾病和癌癥治療中的臨床試驗進展。 閤成生物學與基因綫路的設計： 閤成生物學緻力於設計和構建具有新功能的生物部件、設備和係統。本章將介紹如何利用分子剋隆技術，設計和構建復雜的基因綫路，從而賦予微生物新的代謝通路或調控功能，為生物製造、環境修復等領域帶來新的機遇。 第三篇：實驗操作詳解與問題排查 理論學習最終要落腳於實踐。本篇將提供詳細的實驗操作步驟，並針對實驗中可能遇到的常見問題，提供係統性的排查和解決方案，幫助讀者順利完成分子剋隆實驗。 第七章：常用分子剋隆實驗操作規程 DNA的酶切與瓊脂糖凝膠電泳： 詳細介紹限製性內切酶反應的最佳條件，以及如何通過瓊脂糖凝膠電泳分離和鑒定DNA片段。我們將提供不同濃度凝膠的選擇指導，以及電泳槽的正確搭建與使用。 DNA連接反應： 詳細介紹DNA連接酶反應的優化條件，包括底物濃度、反應時間、溫度等，並提供不同DNA片段連接的成功經驗。 大腸杆菌轉化： 分步介紹熱激法和電穿孔法轉化大腸杆菌的詳細操作步驟，包括感受態細胞的製備、轉化條件的優化以及轉化效率的評估。 菌落PCR鑒定： 介紹如何利用菌落PCR快速鑒定重組質粒，包括引物的選擇、PCR反應條件的優化以及結果的判讀。 質粒DNA的提取與純化： 提供從小量到大量質粒DNA提取的詳細方法，包括堿裂解法和矽柱法，並介紹如何使用分光光度計和凝膠電泳評估質粒DNA的濃度和純度。 PCR産物的迴收與純化： 詳細介紹瓊脂糖凝膠電泳提取PCR産物和矽柱法迴收PCR産物的操作步驟。 DNA測序的應用與結果解讀： 簡要介紹Sanger測序和高通量測序的基本原理，以及如何利用測序結果驗證剋隆的準確性，並解讀可能齣現的突變或嵌閤體。 第八章：實驗過程中常見問題分析與解決 酶切效率不高或不完全： 分析可能導緻酶切效率低下的原因，如酶的活性、底物DNA的質量、反應條件不當等，並給齣相應的解決方案，例如更換酶、優化反應條件、增加酶量等。 連接效率低下或無連接産物： 探討影響DNA連接效率的因素，如DNA片段濃度、末端互補性、連接酶活性、反應時間等，並提供優化建議，例如提高DNA濃度、延長反應時間、使用退火處理等。 轉化效率低： 分析轉化效率低下的原因，包括感受態細胞的質量、轉化方法的選擇、抗生素篩選條件的設定等，並提供提高轉化效率的策略。 菌落PCR鑒定假陽性或假陰性： 解釋可能導緻菌落PCR鑒定齣現錯誤的原因，如引物設計不當、PCR條件不閤適、汙染等，並提供糾正措施。 質粒提取物DNA降解或純度不高： 分析DNA降解的原因，如核酸酶汙染、操作不當等，以及純度不高對後續實驗的影響，並提供提高DNA質量的建議。 PCR擴增無産物或齣現非特異性條帶： 詳細分析PCR擴增失敗的常見原因，如模闆DNA質量差、引物設計不當、退火溫度不適宜、dNTPs濃度不當等，並給齣相應的優化方案。 實驗結果重復性差： 探討影響實驗重復性的因素，如試劑的質量、操作的規範性、環境因素等，並強調標準化操作和記錄的重要性。 結語 分子剋隆技術是理解和改造生命體最強大的工具之一。本書的編寫，力求將復雜的技術原理和精細的實驗操作融會貫通，希望能夠成為您在分子剋隆領域探索過程中可靠的助手。生命科學的研究是一場永無止境的探索，願您在掌握瞭這些基礎知識和技能之後，能夠在此基礎上不斷創新，為生命科學的進步貢獻自己的力量。 附錄（未在正文中詳細展開，但包含在圖書整體內容中） 常用分子生物學試劑的保存與使用指南 分子生物學常用術語匯編 實驗記錄的規範與重要性 數據分析與圖錶繪製的建議

評分☆☆☆☆☆

坦白說，我之前對分子剋隆技術一直有些模糊的概念，總覺得它很神秘，操作也很復雜。然而，當我拿到這套《分子剋隆實驗指南》（平裝，中下上三冊）後，這種感覺瞬間煙消雲散。這本書就像一把鑰匙，為我打開瞭通往分子剋隆世界的大門。它的內容之詳盡，讓我感到驚喜。從最基礎的酶切、連接，到復雜的基因編輯、文庫構建，幾乎囊括瞭分子剋隆的方方麵麵。書中對於每一個實驗步驟的描述都極為細緻，甚至連試劑的準備、儀器的操作都考慮到瞭。最重要的是，它不僅僅告訴你“怎麼做”，還會告訴你“為什麼這麼做”，解釋瞭各種反應的機理，以及不同條件下操作可能産生的影響。這對於我這樣的初學者來說，簡直是福音。我曾經嘗試過一些網上的教程，但總感覺碎片化，不夠係統。而這套書，條理清晰，邏輯性強，讓我能夠建立起一個完整的知識體係。插圖也非常生動形象，幫助我更好地理解那些抽象的概念。我已經迫不及待地想動手實踐瞭，我相信這套書能夠幫助我剋服初期的睏難，順利完成我的實驗項目。

評分☆☆☆☆☆

這套《分子剋隆實驗指南》的平裝版本，著實讓我對分子剋隆這門技術有瞭全新的認識。我一直認為它是一門高深的學問，但讀瞭這本書後，發現它也可以變得如此易於理解和實踐。書的裝幀雖然是平裝，但紙張的質量很好，印刷清晰，閱讀起來非常舒適。上下中三冊的配置，也保證瞭內容的完整性和係統的性。從基礎概念到復雜的實驗技術，這本書都進行瞭詳盡的闡述。我最喜歡的部分是書中對各種實驗技術的原理進行的深入剖析，它不僅僅是教你如何一步步操作，更重要的是讓你理解每一步操作背後的科學原理，這樣纔能在遇到問題時，自己找到解決的辦法。而且，書中提供瞭大量的實驗案例，這些案例都非常貼近實際研究，讓我能夠更直觀地理解書中的內容。我特彆欣賞書中關於安全操作和倫理規範的說明，這對於實驗室工作來說是至關重要的。我已經迫不及待地想將書中的知識應用到我的實驗中，我相信這套書一定會成為我實驗室研究的得力助手。

評分☆☆☆☆☆

這套《分子剋隆實驗指南》絕對是我近年來閱讀過的最“有用”的書籍之一。作為一名科研工作者，我深知一本高質量的實驗手冊對於研究進展的重要性。這套書，平裝三冊，內容紮實，足以應對各種復雜的分子剋隆實驗需求。它的編排方式非常人性化，不僅有詳盡的操作步驟，更深入地解釋瞭每一步背後的生化原理和可能遇到的問題。我曾經在某個關鍵步驟上卡瞭很久，翻閱這套書的相應章節後，茅塞頓開，不僅解決瞭當下問題，還對整個實驗有瞭更深刻的理解。書中的案例分析也非常實用，涵蓋瞭基因剋隆、基因錶達、蛋白質互作等多個領域，能夠幫助我將理論知識與實際操作相結閤。而且，翻譯的版本質量非常高，術語準確，語言流暢，讀起來沒有任何障礙，這對於理解復雜的生物化學概念至關重要。我特彆欣賞書中對於實驗設計的討論，它教會我如何根據研究目標設計齣最優的實驗方案，如何進行對照實驗，以及如何解釋實驗結果。這已經超越瞭一本操作手冊的範疇，更像是一部分子剋隆領域的“百科全書”和“智慧寶典”。我非常期待用這本書指導我的下一步研究，我相信它會極大地提升我的實驗效率和研究水平。

評分☆☆☆☆☆

作為一名實驗室的資深研究員，我見證瞭分子剋隆技術的發展和演變，手中也積纍瞭不少相關的書籍。而這套《分子剋隆實驗指南》（中文翻譯版，冷泉港實驗室齣品，科學齣版社發行，平裝三冊）絕對是其中最值得稱道的一本。它的內容深度和廣度都達到瞭一個令人驚嘆的水平。書中不僅涵蓋瞭經典的分子剋隆技術，還及時更新瞭近些年發展迅速的新技術，如CRISPR-Cas9基因編輯等，這對於保持研究的前沿性至關重要。對於我來說，這本書最大的價值在於它提供的“故障排除”指南。實驗中總會遇到各種預料之外的問題，而這本書中對各種常見問題及其解決方案的詳細分析，能夠極大地節省我摸索的時間，避免不必要的重復勞動。此外，書中對實驗設計的討論也非常有見地，它不僅僅是提供操作流程，更是在引導讀者如何從科學問題的本質齣發，設計齣高效、可靠的實驗方案。我尤其喜歡書中關於數據分析和結果解讀的部分，這對於最終得齣有意義的結論至關重要。這套書，我敢說，絕對是分子剋隆領域研究者的案頭必備。

評分☆☆☆☆☆

一本真正能夠引領我深入分子剋隆世界的寶典！我拿到這套書的時候，簡直像發現瞭失落的寶藏。書的裝幀非常精美，即使是平裝，拿在手裏也很有質感。上下中三冊的厚度，足以說明其內容的豐富和翔實。冷泉港實驗室的名字本身就代錶著權威，科學齣版社的翻譯質量更是讓我安心。翻開第一頁，撲麵而來的是嚴謹的科學態度和清晰的邏輯。即使是對於我這樣剛入門的讀者，也能感受到作者的良苦用心。每一章節的編排都循序漸進，從基礎概念的介紹，到各種常用技術的詳解，再到實驗設計的思路和疑難解答，幾乎涵蓋瞭分子剋隆領域的所有重要方麵。我特彆喜歡書中對實驗原理的闡述，總能讓我理解“為什麼”這樣做，而不是僅僅停留在“怎麼做”。插圖和圖錶的運用也恰到好處，將復雜的流程和結果可視化，大大減輕瞭閱讀的負擔。而且，這本書不僅僅是教你操作，更重要的是培養你的科學思維和解決問題的能力。它就像一位經驗豐富、耐心細緻的導師，隨時在我身邊指導，讓我少走瞭許多彎路。我迫不及待地想要開始我的實驗，相信這套書一定會成為我實驗室裏不可或缺的夥伴。