生命科学实验指南系列：精编细胞生物学实验指南 [Short Protocols in Cell Biology] pdf epub mobi txt 电子书 下载 2025

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[美] J.S.博尼费斯农 等 著，章静波，方瑾，王海杰 等 译

图书标签:

• 细胞生物学
• 实验指南
• 生命科学
• 实验技术
• 细胞实验
• 分子生物学
• 生物技术
• 实验室手册
• Short Protocols
• 科研工具书

出版社： 科学出版社

ISBN：9787030175793

版次：1

商品编码：12033417

包装：平装

丛书名： 生命科学实验指南系列

外文名称：Short Protocols in Cell Biology

开本：16开

出版时间：2007-01-01

用纸：胶版纸

页数：838

字数：1242000

正文语种：中文

内容简介

　　《生命科学实验指南系列：精编细胞生物学实验指南》内容翔实全面，主要包括：细胞培养、细胞的制备与分离、亚细胞组分分离和细胞器分离、抗体、显微镜技术、细胞蛋白质的特性、电泳与免疫印迹、蛋白标记和免疫沉淀、蛋白质的磷酸化作用、蛋白质转运，以及细胞增殖、衰老和死亡、体外重建、细胞黏附和细胞外基质、细胞的能动性、细胞器运动。全书还附有各种实用信息和数据，包括试剂与溶液的配制、细胞生物学研究中常用的药物概要和各种常用技术的介绍等。

内页插图

目录

译者序
前言
第1章 细胞培养
单元1．1 哺乳动物细胞培养的基本方法
基本方案单层细胞的胰酶消化和传代
备择方案悬浮培养的细胞传代
支持方案1 人单层贴壁细胞的冻存
支持方案2 悬浮细胞的冻存
支持方案3 人细胞系的解冻与复苏
支持方案4 用血细胞计数板和台盼蓝染色法测定细胞数目及活性
支持方案5 细胞运输的准备
单元1．2 适于哺乳动物细胞的培养基
基本方案1 制备含血清的培养基
基本方案2 制备血清减量或无血清培养基
基本方案3 HAT选择培养基的制备
基本方案4 转化细胞在软琼脂中的生长
支持方案1 培养基中pH的调节
支持方案2 抗生素在培养基中的应用
单元1．3 细胞培养的无菌技术
基本方案1 无菌技术
基本方案2 层流式超净台的使用
单元1．4 灭菌和过滤
基本方案1 液体的高压灭菌
备择方案干燥物品的高压消毒
基本方案2 干热灭菌和清除热原法
基本方案3 消毒剂的应用：70%乙醇
溶液的过滤除菌
基本方案4 真空过滤
基本方案5 小体积非水溶性液体的正压过滤
单元1．5 确定和控制细胞培养的微生物污染
基本方案1 细菌和真菌污染的检测
基本方案2 直接培养法检测支原体污染
基本方案3 应用抗生素控制微生物污染
单元1．6 酵母培养及培养基
培养基的制备
酵母培养的综合考虑

第2章 细胞的制备与分离
单元2．1 成纤维细胞培养的建立
基本方案
单元2．2 人淋巴细胞的制备和培养
基本方案1 通过高分子质量的蔗糖一泛影钠（Ficoll-Hypaque）梯度离心制备淋巴细胞
基本方案2 从淋巴细胞群里制备单核／巨噬细胞和树突状细胞
基本方案3 通过包被在磁珠表面的单克隆抗体分选T细胞和B细胞
单元2．3 人脐静脉内皮细胞的制备
基本方案
单元2．4 转染EB病毒产生永生的B细胞株
基本方案
单元2．5 激光捕获显微切割
基本方案从组织切片中分离一种纯的细胞群
支持方案苏木素和伊红染色组织的激光显微切割

第3章 亚细胞组分分离和细胞器分离
单元3．1 细胞组分分离概述
单元3．2 分离大鼠肝细胞质膜片层与浆膜结构域
基本方案1 分离质膜片层
支持方案1 检测碱性磷酸二酯酶I的活性
基本方案2 分离质膜结构域
支持方案2 K+激活的对硝基苯酚磷酸酯酶活性测定实验
支持方案3 5'-核苷酸酶活性测定实验
支持方案4 间接免疫荧光法检测与质膜片层相连的蛋白质
单元3．3 利用差速及密度梯度离心法从组织和细胞中分离Golgi膜
基本方案1 利用蔗糖密度筛从大鼠肝脏中快速分离Golgi膜
基本方案2 将大鼠肝脏提取的轻线粒体组分悬浮于非连续的蔗糖梯度液中来分离Golgi膜
基本方案3 将培养的细胞悬浮于非连续的蔗糖梯度液中来分离Golgi膜
基本方案4 用自发形成梯度的IODIXANOL梯度液从肝细胞微粒体组分中分离Golgi膜
支持方案 测定UDP-半乳糖半乳糖基转移酶
单元3．4 利用差速离心及密度梯度离心从组织及细胞中分离溶酶体
基本方案1 使用自发形成梯度的PERCOLL梯度液从大鼠肝脏中分离溶酶体
基本方案2 利用自发形成梯度的PERCOLL梯度液从培养的人HL-60细胞中分离溶酶体
支持方案1 酸性磷酸酶的测定
……
第4章 细胞生物学研究的工具——抗体
第5章 显微镜术
第6章 细胞蛋白质的特性
第7章 电泳与免疫印迹
第8章 蛋白标记和免疫沉淀
第9章 蛋白质的磷酸化作用
第10章 蛋白质转运
第11章 细胞增值，细胞衰老和细胞死亡
第12章 体外重建
第13章 细胞黏附与细胞外基质
第14章 细胞的能动性
第15章 细胞器运动
附录
参考文献
索引

前言/序言

　　细胞生物学的研究体系日益扩大。要想领略这种扩展，途径之一便是去参加本领域的重要会议，诸如美国细胞生物学学会（American Society for CellBiology）的年会。你可以悠闲地漫步于大厅的展板区，甚至于都不必驻足于某一版面，就可以深刻感受到细胞生物学范畴之辽阔。对于那些在过去一二十年间经常光顾这种展厅的人们来说，细胞生物学的这种动态态势以及这种爆发性的发展是毫不奇怪的——在愈来愈多的研究体系中只能是愈来愈多。以往展板区域主要由细胞的画面主宰，这些细胞都经由电子显微镜学家的固定（很呆板地），并且只是以黑白两色显示出来。虽然电子显微镜目前对于我们了解细胞构筑仍然有贡献，但新近展板区已出现一排排活细胞的电脑增晰视频影像（computer-enhanced video images），这些细胞均经过不完全活性染色才显示，诸如罗丹明红（rhodamine red）、荧光素绿（fluorescein green）以及被称作绿色荧光蛋白的特异绿色等。冰冻蚀刻的加入则以冷冻定帧法（freeze frame）来展现细胞。此外在视频影像间还散在有另一些展板，它们详细记录了众多细胞成分的分子特征。还有一些展板报道了用基因削减或基因敲除显示的有关它们功能的新近发现。正如罗盘的星点有其应有的位置一样，酵母、果蝇和蠕虫的遗传学研究兴旺于一方，而在细胞生物学基础研究和临床医学之间架设桥梁的研究也在另一方不断地涌现。
　　很显然，今天称自己为细胞生物学家的科学家乃是一个多学科群体，这种多学科性质隐藏着巨大的学术价值。那些曾经将研究学科分隔开来的边界如今已逐渐消失，细胞生物学家也已赞同没有哪一种单独的途径可以揭开细胞的奥秘。新技术和新技术学随着试验成真并肩而至，并且用作细胞生物学在本领域开拓的工具。正是细胞生物学的这一面目的变化以及其代表巨大挑战的方法学共同促成了《精编细胞生物学实验指南》的问世。本书要阐述的一个基本问题是，在细胞生物学领域里应在何处划出其边界。我们的决定是拒绝划出这种边界，因为它们完全是人为的，并且，糟糕的是，会产生反效果。相反，我们企图努力弥合该领域的多样性。本指南要包括那些对细胞生物学家仍有价值的“经典的”方法，也要提供旨在成为今后之经典的程序。
　　我们没有理由怀疑细胞生物学的研究领域随时都会很快地停滞。事实上，一名细胞生物学家之所以激励不已，部分地出于革新和新发现所带来的不间断的惊奇。为此，我们这一专业需要一些可靠的、便于使用的，而且还要反映出该领域扩展的实验方法学的资料。为了符合这一要求，我们收集了覆盖细胞生物学众多方面的一系列实验方案，虽然这一套方案还不完全，但可以认为它是一个“初学者工具箱”，包括有许许多多我们这一专业中最常用和必需的工具。

精选生物技术前沿：基于分子调控的系统生物学方法与应用 本书汇集了当前生命科学研究中，尤其是在分子机制解析与系统整合层面最具影响力的前沿实验技术与理论框架。它并非聚焦于某一特定学科的经典实验操作手册，而是以跨学科的视角，深入探讨如何利用先进的分子工具来理解复杂的生物系统，并将其应用于疾病模型构建与药物研发。 第一部分：高分辨率分子成像与动态追踪技术 本部分详述了超越传统荧光显微镜限制的成像策略，重点在于活细胞内分子事件的实时、高精度观察。 1. 超分辨显微成像（Super-Resolution Microscopy, SRM）的深度应用： 涵盖STED（受激发射损耗）、PALM/STORM（光激活定位显微）以及SIM（结构光照明显微）的原理、优化参数设置及数据处理流程。特别关注如何利用这些技术解析细胞器间相互作用的纳米尺度结构，以及蛋白质复合物的组装动态。例如，深入讨论了如何结合SRM与FRET（荧光共振能量转移）技术来定量测量膜上受体二聚化或寡聚化的亲和力及其在信号传导中的作用。 2. 多维活细胞成像与光遗传学集成： 介绍如何将高通量时间序列成像与光控技术（如光敏通道或转录因子）相结合，实现对细胞行为的精确时空干预。内容包括设计最优化的光照方案以减少光毒性，以及如何利用深度学习算法对多通道、多时间点数据进行降噪和特征提取，以揭示细胞周期调控的瞬态事件。 3. 活体组织与器官水平的分子探针开发： 侧重于开发对特定生理状态（如pH、氧化还原电位、钙离子浓度波动）敏感的荧光或磁共振探针。详细阐述了探针的分子设计原则、体内生物相容性测试以及共聚焦拉曼成像在监测代谢流向中的新兴应用。 第二部分：组学技术在功能基因组学中的整合应用 本部分强调如何利用多组学数据整合，从基因组、转录组到蛋白质组、代谢组层面，系统性地解析生物学功能。 1. 单细胞多组学分析的实验优化： 详述了单细胞RNA测序（scRNA-seq）、单细胞ATAC测序（scATAC-seq）及同步分析技术（如10x Genomics平台或其他微流控平台）的实验流程优化。重点在于克服细胞捕获效率、文库构建偏差以及批次效应的控制。内容延伸至如何设计高质量的对照组和稀有细胞群的富集策略。 2. 染色质高级结构与表观遗传调控的动态研究： 深入探讨基于高通量测序的互作技术（Hi-C、ChIA-PET）的实验改进，特别是针对低输入样本和特定组织的选择性富集方法。更前沿的内容包括利用PRO-seq或NET-seq技术实时追踪RNA聚合酶的转录延伸速度，并结合CRISPR干扰（CRISPRi）技术来精确调控染色质可及性。 3. 蛋白质组学的高精度定量与相互作用网络构建： 介绍了基于TMT/iTRAQ标记的定量蛋白质组学在探查信号通路激活或抑制后的蛋白丰度变化。着重讲解如何设计靶向或非靶向的蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）捕获实验（如AP-MS），以及利用高分辨率质谱解析后翻译修饰（PTMs）的位点特异性及其对蛋白功能的影响。 第三部分：基因编辑与合成生物学的系统构建 本部分聚焦于利用精确的分子工具实现对生命系统的重塑与改造，并评估这些改造的整体功能输出。 1. 新一代基因编辑系统的优化与递送策略： 不仅仅停留在基础的Cas9操作，而是深入探讨了碱基编辑（Base Editing）和先导编辑（Prime Editing）的脱靶风险评估和体内外递送系统的优化，如腺相关病毒（AAV）载体的衣壳选择、脂质纳米颗粒（LNP）的制备与靶向修饰。同时，讨论了如何利用CRISPR筛选技术（如Drop-out screens或Synergistic screens）来发现新的功能性基因组区域。 2. 合成基因回路的构建与稳健性测试： 介绍了如何设计并构建具有特定逻辑功能（如振荡器、开关、反馈回路）的基因网络。实验部分侧重于如何量化这些回路的性能参数，如本底噪声、开关延迟时间、稳态输出的精确度，并探讨如何利用“黑盒模型”来预测复杂回路在不同宿主环境中的表现。 3. 细胞命运重编程的分子机制与效率提升： 详细介绍了体外诱导多能干细胞（iPSC）技术中的关键分子调控因子筛选。实验环节重点分析了如何利用流式细胞术和单细胞分析技术来识别并富集处于“重编程中间态”的细胞群，以及如何通过优化细胞培养基或引入小分子化合物来加速和稳定重编程过程。 第四部分：复杂生物系统建模与数据整合分析 本部分强调将实验数据转化为可预测的数学模型，实现对生物系统行为的深入理解。 1. 基于数据的动力学建模： 介绍如何将来自荧光衰减、酶促反应速率或细胞增殖曲线的实验数据，拟合至常微分方程（ODE）或偏微分方程（PDE）模型中。重点讲解如何利用贝叶斯推断或MCMC方法来估计模型的关键动力学参数，并进行参数不确定性分析。 2. 网络拓扑学分析在疾病信号传导中的应用： 阐述了如何将PPI数据、基因表达数据和磷酸化数据整合构建功能性信号网络。通过网络分析（如中心性指标、模块化分析），识别在特定病理条件下（如癌症或神经退行性疾病）最有可能成为潜在治疗靶点的“枢纽”蛋白。 本书旨在为具有一定分子生物学基础的研究人员提供一套系统性的、面向前沿的实验设计与数据解析的思维框架，而非仅仅是基础操作的罗列，强调的是如何将多技术平台无缝对接，以解决生命科学中最复杂的“系统性”问题。

评分☆☆☆☆☆

我一直对细胞信号转导这个宏大的主题充满好奇，但往往觉得概念过于抽象，难以找到切入点。这本书的信号通路分析部分，简直是我一直以来寻找的“钥匙”。它并没有仅仅罗列出各种信号分子和受体，而是通过一系列具体的实验设计，教我如何去“追踪”这些信号是如何在细胞内部传递的。我非常喜欢书中关于如何检测磷酸化蛋白的实验方案，因为很多信号转导的核心就是蛋白质的磷酸化和去磷酸化。作者详细介绍了Western Blotting和ELISA等技术在这一领域的应用，并且还提供了如何利用激酶抑制剂来阻断特定信号通路，并观察其 downstream 效应的实验思路。更让我惊喜的是，书中还涉及到了如何利用荧光报告基因系统来实时监测特定信号通路的激活情况。这让我觉得，我不仅仅是在学习理论，而是在学习如何“看见”细胞内的信号流动。这本书为我打开了一扇通往理解细胞复杂互联网络的大门，让我对接下来的学习和研究充满了期待。

评分☆☆☆☆☆

这本书在探索细胞骨架动力学方面，简直是我的救星。过去，我常常在阅读文献时对肌动蛋白和微管的动态变化感到困惑，总觉得理论描述和实际观察之间存在鸿沟。但这本书以一种非常直观的方式解决了我的问题。它详细介绍了如何利用荧光标记技术来实时追踪细胞骨架蛋白的组装和解聚过程，并且对于如何选择合适的荧光染料、如何优化成像条件以减少光毒性，都给出了非常实用的建议。我尤其欣赏书中对几种常用显微成像技术的对比分析，比如如何根据实验目的选择活细胞成像还是固定细胞成像，以及如何处理长时间延时成像的数据。书中还包含了如何通过药物处理来扰乱细胞骨架动力学，并观察其对细胞形态和运动影响的实验设计。这些内容不仅帮助我理解了细胞骨架在细胞分裂、细胞迁移等过程中的关键作用，更重要的是，它为我设计自己的相关实验提供了坚实的基础。读完这部分，我感到自己对细胞的“骨骼”有了更形象、更动态的认识，也对如何进一步探究其调控机制有了更清晰的思路。

评分☆☆☆☆☆

在接触到这本书的细胞周期调控实验部分之前，我总是觉得细胞周期是一个相对静态的概念，就是DNA复制、染色体分离然后细胞分裂。但这本书彻底改变了我的看法。它以极其生动和细致的方式，展示了细胞周期中一系列精妙的分子开关是如何协同工作的。我被书中关于Cyclin/CDK复合物活性检测的实验方案深深吸引，它让我看到了一个动态的、不断变化的调控网络。作者详细解释了如何通过Western Blotting来检测关键周期蛋白的表达水平和磷酸化状态，并且还提供了如何利用流式细胞术来分析细胞在不同周期阶段的分布。我尤其欣赏书中关于使用RNAi技术或CRISPR/Cas9技术来敲低关键调控因子，并观察其对细胞周期进程影响的实验设计。这让我明白，通过干预特定分子，我们可以直接探究其在细胞周期中的作用。这本书让我感觉，细胞周期不再是教科书上僵硬的图表，而是充满活力和精巧设计的生命过程。

评分☆☆☆☆☆

作为一名对细胞凋亡机制颇感兴趣的学生，我发现这本书在这一部分的阐述简直是教科书级别的。作者并没有仅仅停留在理论层面，而是深入浅出地讲解了如何通过一系列精密的实验来揭示细胞凋亡的分子事件。我特别着迷于书中关于caspase激活实验的描述，从样本处理到酶活性检测，每一个步骤都清晰明了。更重要的是，书中还探讨了如何区分不同类型的细胞死亡，例如凋亡、坏死和自噬，这对于理解细胞在不同生理或病理状态下的命运至关重要。我非常喜欢书中关于线粒体通透性转变孔（mPTP）开放检测的实验方案，它让我明白了如何直接观察细胞凋亡的关键信号。此外，书中还提供了关于TUNEL染色和Annexin V-FITC/PI染色的详细操作指南，这两种方法在评估细胞凋亡方面非常常用，但细节操作往往容易出错。这本书的指导让我在这些复杂的技术面前不再感到茫然，而是充满信心。它不仅仅是提供了实验方法，更是在传授一种严谨的科学思维方式，让我懂得如何设计出能够精确回答科学问题的实验。

评分☆☆☆☆☆

这本书给我带来了全新的视角，尤其是在细胞膜转运的章节。我一直对这个过程感到好奇，但市面上很多资料要么过于理论化，要么实验步骤含糊不清。这本书的描述则非常清晰，它不仅解释了不同转运机制的原理，更重要的是，它提供了一系列循序渐进的实验方案。我特别喜欢它对质膜蛋白共定位实验的详细解析，从标记物的选择到共聚焦显微镜的参数设置，都考虑得非常周到。作者还深入探讨了实验结果的解读，包括如何区分真实的共定位和伪影，以及如何利用统计学方法来验证观察到的现象。读完这一部分，我感觉自己对细胞信号传导过程中膜蛋白的功能有了更深刻的理解，也跃跃欲试地想要在实验室里动手实践。书中引用的参考文献也相当丰富，为进一步深入研究提供了宝贵的线索。虽然我对某些高级实验技术还不太熟悉，但这本书的指导让我觉得这些挑战并非不可逾越。它就像一位经验丰富的导师，一步步地引导我走向对细胞生命活动更深层次的认知。

评分☆☆☆☆☆

你还应该让肩胛骨保持紧张，双肘尽量靠前。这可以使上背部保持足够的紧张，并使杠铃处于正确的位置。两点之

评分☆☆☆☆☆

书不错，挺好的，比较满意。

评分☆☆☆☆☆

书经典，多的不用说的，就是赞一下再京东物流和客服，很棒

评分☆☆☆☆☆

买的时候没注意，出版日期比较早，内容已经有点过时了

评分☆☆☆☆☆

你还应该让肩胛骨保持紧张，双肘尽量靠前。这可以使上背部保持足够的紧张，并使杠铃处于正确的位置。两点之

评分☆☆☆☆☆

半就会失败。深蹲时，杠铃重心必须靠近髋关节，远离脚尖。

评分☆☆☆☆☆

科学出版社的书真是越来越贵了，并且书还没有切割整齐

评分☆☆☆☆☆

科学出版社的书真是越来越贵了，并且书还没有切割整齐

评分☆☆☆☆☆

书不错，挺好的，比较满意。