現代蛋白質實驗技術

現代蛋白質實驗技術 pdf epub mobi txt 電子書 下載 2025

劉國琴 等 編
圖書標籤:
  • 蛋白質組學
  • 蛋白質化學
  • 分子生物學
  • 生物化學
  • 實驗技術
  • 生物技術
  • 生命科學
  • 蛋白質分析
  • 蛋白質錶達
  • 蛋白質純化
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齣版社: 中國農業大學齣版社
ISBN:9787565504273
版次:1
商品編碼:10859905
包裝:平裝
開本:16開
齣版時間:2011-10-01
用紙:膠版紙
頁數:218
字數:263000
正文語種:中文

具體描述

內容簡介

《現代蛋白質實驗技術》有以下幾個特點:①實驗項目內容充實,技術先進。所選實驗項目主要來自編寫者多年的教學經驗和科研積纍,除傳統蛋白質實驗技術如SDS-PAGE、免疫印跡、雙嚮電泳、離子交換層析、凝膠過濾、親和層析、酶動力學分析等外,還包括凝膠阻滯電泳、質譜技術、酵母雙雜交、Pull—down、Far—western、雙分子熒光互補、蛋白質體外磷酸化、蛋白質結晶、抗體純化、藥物篩選等。②實驗技術信息量豐富,參考價值高。書中除瞭39個實驗項目外,還有針對性地編寫瞭33個實驗輔助說明穿插在有關實驗中,如微升量級樣品的透析、雜交膜的選擇、常見蛋白酶抑製劑的使用與保存、包涵體蛋白的復性、融閤標簽的切割、Ni填料的再生、顯色後NC膜上蛋白質條帶的再利用、免疫印跡中的ECL檢測法、激發光譜與發射光譜等。③內容編寫精練、易懂,實用性強。《現代蛋白質實驗技術》編者為具有多年實驗教學經驗的教師和掌握蛋白質先進技術的科研人員,其通力閤作保證瞭實驗教材的編寫質量。該書適閤作為生命科學專業高年級本科生實驗教材,也適閤生命科學相關專業研究生使用。

目錄

第一部分 蛋白質鑒定
實驗一 SDS-PAGE測定蛋白質分子質量
實驗輔助說明1:SDS一樣品緩衝液及蛋白質樣品處理
實驗二 SDS-聚丙烯酰胺梯度凝膠電泳
實驗輔助說明2:蛋白質分子質量標準
實驗三 利用非變性凝膠電泳分析蛋白質寡聚體
實驗輔助說明3:電泳乾膠製備
實驗四 血清蛋白的聚丙烯酰胺凝膠雙嚮電泳分析(非預製膠)
實驗輔助說明4:預製膠條
實驗五 利用凝膠阻滯實驗(EMSA)分析轉錄因子
實驗輔助說明5:生物素化與親和素
實驗六 凝膠過濾層析法鑒定蛋白質分子質量
實驗輔助說明6:層析凝膠使用後的長期保存
實驗七 MALDl-TOF-MS質譜法鑒定蛋白質
實驗輔助說明7:質譜分析用蛋白質樣品製備注意事項
實驗八 葉綠素蛋白復閤物的提取與光譜學測定
實驗輔助說明8:激發光譜與發射光譜
實驗九 微絲結閤蛋白的結閤常數測定
實驗十 肌動蛋白聚閤動力學分析(光散射法)
實驗十一 蛋白質濃度(或含量)的測定

第二部分 蛋白質錶達與分離純化
實驗十二 His-tag融閤蛋白的原核錶達及純化
實驗輔助說明9:抗原決定簇在重組蛋白中的應用
實驗輔助說明10:Ni2+親和填料的再生與保存
實驗十三 His-tag融閤蛋白可溶性錶達的快速微量檢測
實驗輔助說明11:包涵體蛋白的復性
實驗輔助說明12:常見蛋白酶抑製劑的使用與保存

實驗十四 綠色熒光蛋白的重組錶達與純化
實驗輔助說明13:GFP的金屬離子螯閤層析純化
實驗十五 蛋白質重組錶達的可視化定量方法
實驗輔助說明14:菌體的不同裂解方法
實驗十六 GST融閤蛋白的錶達與親和純化
實驗輔助說明15:用蛋白酶切除蛋白標簽
實驗十七 利用Bac-to-Bac杆狀病毒錶達係統在昆蟲細胞中錶達外源蛋白
實驗輔助說明16:昆蟲細胞培養
實驗十八 PEG介導擬南芥葉肉原生質體中外源蛋白的瞬時錶達
實驗輔助說明17:常用熒光蛋白分子波長特性
實驗十九 親和層析法分離青豌豆凝集素
實驗輔助說明18:透析袋的處理
實驗輔助說明19:微升量級蛋白質樣品的透析
實驗二十 蛋白質離子交換層析
實驗輔助說明20:離子交換劑的種類與再生
實驗二十一 DNA親和柱的製備和DNA結閤蛋白的純化
實驗輔助說明21:蛋白質電泳膠的銀染色法
實驗二十二 利用蔗糖密度梯度超速離心分離蛋白質
實驗輔助說明22:連續性蔗糖密度梯度製備
實驗二十三 豬腦微管蛋白的製備
實驗二十四 兔骨骼肌肌動蛋白的製備
實驗二十五 蛋白質結晶--懸滴法
實驗輔助說明23:載片的矽烷化
實驗輔助說明24:座滴法和三明治滴法培養蛋白質晶體
實驗二十六 蛋清溶菌酶的純化以及結晶
實驗輔助說明25:蛋清中主要蛋白的特性

第三部分 酶活性分析
實驗二十七 果實菠蘿蛋白酶的凝膠過濾純化與活性分析
實驗二十八 果實菠蘿蛋白酶動力學常數的測定
實驗二十九 激酶與底物的體外磷酸化測定
實驗輔助說明26:放射性同位素在生物學研究中的應用及輻射防護
……
第四部分 蛋白質免疫化學與蛋白質互作
附錄一 蛋白質分子質量標準
附錄二 硫酸銨飽和度常用錶
附錄三 常用緩衝液的配製
附錄四 層析填料
附錄五 細胞破碎方法

前言/序言


現代蛋白質實驗技術 書籍簡介: 主題聚焦:蛋白質的結構、功能與相互作用研究 本書是一部係統闡述現代蛋白質科學研究核心技術的專業著作。它深入剖析瞭從蛋白質的發現、分離純化到結構解析及功能機製探索的全過程所依賴的關鍵實驗平颱與操作規範。本書內容涵蓋瞭蛋白質組學的前沿方法、蛋白質結構生物學的經典與新興技術,以及功能驗證的分子生物學工具。 第一部分:蛋白質的獲取與純化——精準分離的基石 本部分詳盡介紹瞭獲取高質量、高純度蛋白質樣品所必需的生物化學與分離科學技術。 細胞裂解與初步分離: 詳細講解瞭不同組織和細胞類型(如細菌、酵母、哺乳動物細胞)的有效裂解策略,包括機械法、酶解法和化學裂解法的適用條件與優化參數。重點闡述瞭如何最大程度地保持目標蛋白質的天然活性,避免蛋白酶降解和非特異性聚集。 層析技術的高階應用: 覆蓋瞭蛋白質純化領域的核心技術——層析。內容不僅包括親和層析(Affinity Chromatography,特彆是基於His-tag、GST-tag或生物素化的應用)、離子交換層析(Ion Exchange Chromatography)和凝膠過濾層析(Size Exclusion Chromatography)的基礎原理,更深入探討瞭多維層析策略的構建。例如,如何結閤兩種或三種不同的層析模式,實現對復雜蛋白質混閤物中目標蛋白的高效分離和脫鹽純化。對高分辨率的毛細管電泳(Capillary Electrophoresis, CE)在純化驗證中的應用也進行瞭介紹。 膜蛋白的特殊處理: 鑒於膜蛋白研究的復雜性,本書專門開闢章節討論膜蛋白的穩定化和純化。包括去垢劑(如Detergents)的選擇、脂質體構建技術以及利用錶麵展示係統(Surface Display)進行功能性篩選的方法。 第二部分:蛋白質結構解析——探究分子構象的“顯微鏡” 結構信息是理解蛋白質功能的關鍵。本部分聚焦於確定蛋白質三維結構的主流技術及其最新進展。 X射綫晶體學: 從蛋白質結晶的優化條件篩選(如微重力結晶、受限體積法)到數據采集和結構解析(包括分子置換法、同源晶體法)。特彆強調瞭弱相互作用蛋白復閤物的共晶策略以及解決晶體孿晶問題的實用技術。 冷凍電子顯微鏡(Cryo-EM): 詳細闡述瞭從樣品製備(鋪膜、冷凍)、圖像采集到三維重建的完整流程。重點討論瞭單顆粒分析(Single Particle Analysis, SPA)在解析大分子機器和膜蛋白復閤物結構中的巨大優勢,以及如何處理低信噪比數據和進行高分辨率重構。 核磁共振波譜學(NMR): 針對中小型蛋白質和動態研究,係統介紹瞭多維核磁技術(如2D/3D HSQC, TOCSY, NOESY)的設置與數據解釋。著重講解瞭如何利用NMR研究蛋白質的柔性區域、溶液中的相互作用界麵以及構象變化。 第三部分:蛋白質功能、修飾與相互作用的檢測 純化和結構獲取後,必須通過功能性實驗來驗證其生物學意義。 酶活性的定量分析: 涵蓋瞭針對氧化還原酶、激酶、磷酸酶等各類酶的標準測活方法,包括實時監測法、耦閤反應法和底物消耗測定法。書中提供瞭多個常用底物和抑製劑的實驗參數參考。 蛋白質的翻譯後修飾(PTMs)分析: 詳細介紹瞭磷酸化、糖基化、泛素化等關鍵修飾的識彆與定位技術。包括使用特異性抗體進行免疫印跡(Western Blotting)的優化、親和富集技術(如金屬離子螯閤親和層析IMAC用於磷蛋白富集),以及高級質譜技術(如定性與定量磷酸肽譜分析)的應用。 蛋白質-蛋白質相互作用(PPIs)研究: 本部分匯集瞭體內(In Vivo)和體外(In Vitro)研究PPIs的工具集: 1. 酵母雙雜交(Y2H)係統: 經典的篩選方法及其在解決“張量”問題(Tension Problem)上的改進方案。 2. 熒光互補技術(FRET/BRET): 用於實時、動態監測細胞內相互作用的距離依賴性檢測。 3. 免疫共沉澱(Co-IP)與質譜聯用: 鑒定蛋白質復閤物組成的全景方法,強調瞭洗脫條件的優化以減少非特異性結閤。 4. 錶麵等離子共振(SPR)與生物層乾涉測量(BLI): 用於定量測定結閤動力學參數($k_{on}, k_{off}, K_D$)的體外高精度方法。 第四部分:蛋白質工程與定嚮進化 本書最後一部分著眼於蛋白質的改造與應用,是實現生物技術目標的關鍵。 定嚮進化策略: 詳細介紹瞭基於DNA的隨機突變(如點突變、錯誤傾嚮PCR)和基於功能篩選(如噬菌體展示、酵母展示)相結閤的方法,用於提高酶的活性、穩定性和底物特異性。 理性設計與位點定嚮突變: 基於結構信息對目標殘基進行精確修改的原理和實施步驟,包括如何利用計算工具輔助設計。 錶達係統的選擇與優化: 比較瞭原核(大腸杆菌)、真核(昆蟲細胞、哺乳動物細胞)以及重組酵母係統在錶達復雜、糖基化或大分子蛋白方麵的優劣,並提供瞭提高重組蛋白錶達産量的培養基優化和共錶達策略。 目標讀者: 本書適閤生物化學、分子生物學、生物物理學及生物工程領域的研究生、博士後研究人員,以及在製藥和生物技術行業從事蛋白質研發與生産的專業技術人員。它不僅是理論指導,更是實驗操作中的實用手冊。

用戶評價

評分

這本書的書名是《現代蛋白質實驗技術》,雖然我還沒有來得及深入閱讀,但從它的封麵設計和內容目錄來看,就已經深深吸引瞭我。我是一名生物科學的研究生,目前正在進行一項關於蛋白質功能的研究,而這本書顯然與我的研究方嚮高度契閤。我特彆期待書中關於蛋白質純化和錶達的部分,因為這是我實驗過程中常常遇到的瓶頸。目錄中列齣瞭多種層析技術,包括親和層析、離子交換層析和凝膠過濾層析,並詳細介紹瞭它們的原理、操作步驟和應用實例。我一直對如何高效地分離和純化特定目標蛋白感到睏惑,相信這本書能夠提供係統的指導和實用的技巧,幫助我優化實驗方案,提高蛋白純度。此外,書中關於蛋白質相互作用研究的技術,如酵母雙雜交、Co-IP和Surface Plasmon Resonance (SPR),也讓我躍躍欲試。理解蛋白質之間的相互作用對於揭示生命過程的奧秘至關重要,而這些先進的技術能夠為我提供強大的工具。我尤其對SPR技術感到好奇,它能夠實時、無標記地檢測分子間的結閤動力學,這對於我研究的蛋白-蛋白相互作用和蛋白-配體結閤非常有價值。我希望這本書能夠詳細講解SPR的實驗設計、數據分析以及常見問題的解決辦法,讓我在實驗室中能夠更自信地運用這項技術。總的來說,這本書似乎是一本集理論與實踐於一體的寶藏,我迫不及待地想通過它來提升我的實驗技能,並將其中的知識應用到我的研究中。

評分

我對《現代蛋白質實驗技術》這本書的初印象,是其名稱所傳達齣的那種“與時俱進”的科學精神。我是一名在生物製藥行業工作的技術人員,日常工作中需要接觸到大量的與蛋白質相關的生産和質量控製環節。雖然我的工作主要集中在應用層麵,但對基礎的實驗技術有深入的瞭解,能夠幫助我更好地理解生産過程中的原理,發現潛在的問題,並提齣改進方案。《現代蛋白質實驗技術》聽起來就像是一本能夠提供最新、最前沿技術信息的手冊。我尤其對書中關於蛋白質標記和修飾的部分産生瞭濃厚的興趣。在藥物研發過程中,對蛋白質進行標記,例如熒光標記或同位素標記,對於追蹤藥物在體內的分布、代謝以及與靶點的相互作用至關重要。同時,瞭解如何對蛋白質進行化學修飾,以改善其穩定性、生物利用度或靶嚮性,也是我們工作中常會遇到的課題。我希望書中能夠詳細介紹各種蛋白質標記策略的原理、方法、試劑選擇以及優缺點,並能提供一些在實際生産和研發中應用這些技術的經驗和注意事項。此外,書中關於蛋白質的定量分析技術,例如ELISA、Western Blot以及質譜分析等,也是我非常關注的內容。準確的蛋白質定量是藥物質量控製的基礎,我希望這本書能夠提供這些技術的最新進展和最佳實踐。這本書,無疑將成為我工作中不可或缺的參考書,幫助我在快速發展的生物製藥領域保持領先。

評分

作為一個對生命科學領域充滿好奇心的普通讀者,我被《現代蛋白質實驗技術》這個書名所吸引,雖然我對具體的實驗技術瞭解不多,但蛋白質在生命活動中的重要性早已深入人心。這本書的齣版,對我來說就像打開瞭一扇通往微觀世界的大門,讓我有機會窺探那些構成生命的基石。我對外包裝的設計頗為欣賞,簡潔而又不失專業感,給人一種嚴謹治學的印象。雖然我不是專業研究人員,但我對書中可能涉及到的“如何讓一個看不見的分子‘顯形’,並觀察它的形態和行為”這樣的概念非常感興趣。例如,書中可能會介紹一些利用熒光標記或顯微成像技術來觀察蛋白質在細胞內的分布和動態變化的方法,這對於理解細胞是如何運作的,以及疾病是如何發生的,具有非凡的意義。我希望這本書能夠用一種相對易懂的方式,為我解釋這些復雜的概念,讓我能夠理解科學傢們是如何一步步揭示蛋白質的秘密的。我對於那些能夠“捕捉”到蛋白質“工作”時的場景的技術,比如利用特定的抗體來定位蛋白質,或者通過基因工程手段在蛋白質上添加“標簽”以便追蹤,感到非常著迷。這本書,我相信能夠滿足我這種非專業人士對科學探索的渴望,讓我能夠對蛋白質在生命科學中的角色有更深刻的認識,或許還能激發我未來學習相關知識的興趣。

評分

這本書的齣版,對我來說,就像是打開瞭一個通往精密科學世界的新窗口。《現代蛋白質實驗技術》這個書名本身就帶著一種嚴謹和前沿的氣息。我是一名對生物化學有濃厚興趣的學生,雖然我可能還沒有機會親自操作這些復雜精密的實驗,但瞭解它們是如何進行的,以及它們能夠揭示哪些關於生命本質的信息,對我來說非常有吸引力。我特彆關注目錄中關於蛋白質結構解析的部分。理解蛋白質的三維結構是理解其功能的基礎,而像是X射綫衍射、核磁共振(NMR)和冷凍電子顯微鏡(Cryo-EM)這樣的技術,無疑是揭示蛋白質精妙結構的利器。我希望書中能夠詳細講解這些技術的基本原理,以及它們在解析蛋白質結構時各自的優勢和局限性。例如,NMR如何“看到”蛋白質在溶液中的狀態,而Cryo-EM又如何能夠解析那些曾經難以結晶的大型蛋白質復閤物的結構,這些都讓我覺得充滿科技的魅力。我期待書中能夠通過生動的圖示和清晰的語言,幫助我理解這些高精尖技術的背後邏輯,以及它們是如何一步步幫助科學傢們構建齣蛋白質的精確三維模型。這本書,無疑為我提供瞭一個學習和瞭解現代生物技術前沿的絕佳機會,讓我能夠站在巨人的肩膀上,遠眺生命科學的未來。

評分

作為一名即將步入科研殿堂的本科生,我對《現代蛋白質實驗技術》這本書的期待是極為務實的。《現代蛋白質實驗技術》這個書名精準地概括瞭這本書的核心內容,這正是我目前最迫切需要的知識。我的畢業論文課題涉及到對某個關鍵酶的活性進行優化,而酶本身就是一種蛋白質,其活性的調控與它的穩定性和構象變化息息相關。因此,書中關於蛋白質穩定性分析和構象變化研究的技術,對我來說具有直接的指導意義。我尤其關注目錄中關於差示掃描量熱法(DSC)和圓二色譜(CD)的部分。DSC能夠測量蛋白質在加熱過程中的能量變化,從而評估其熱穩定性,這對於理解酶在不同溫度下的活性差異至關重要。而CD光譜則能夠提供蛋白質二級結構的信息,比如α-螺鏇和β-摺疊的比例,這對於分析環境因素(如pH、離子強度或變性劑)對酶構象的影響非常有幫助。我希望書中能夠提供詳細的操作流程,包括樣品製備、儀器參數設置以及數據解讀的步驟。更重要的是,我期待書中能夠包含一些案例分析,展示如何利用這些技術來解釋實驗現象,並為後續的實驗設計提供思路。這本書,將是我解決畢業論文難題的得力助手,也必將為我未來的科研道路打下堅實的基礎。

評分

很適閤蛋白和抗體類技術員

評分

很適閤蛋白和抗體類技術員

評分

2011年10月剛剛齣版發行,是正版書。是目前國內關於蛋白質實驗技術方麵的最新和最全麵的書籍,印刷很好,而且書的價格便宜。滿意這次購書。

評分

《現代蛋白質實驗技術》有以下幾個特點:①實驗項目內容充實,技術先進。所選實驗項目主要來自編寫者多年的教學經驗和科研積纍,除傳統蛋白質實驗技術如SDS-PAGE、免疫印跡、雙嚮電泳、離子交換層析、凝膠過濾、親和層析、酶動力學分析等外,還包括凝膠阻滯電泳、質譜技術、酵母雙雜交、Pull—down、Far—western、雙分子熒光互補、蛋白質體外磷酸化、蛋白質結晶、抗體純化、藥物篩選等。②實驗技術信息量豐富,參考價值高。書中除瞭39個實驗項目外,還有針對性地編寫瞭33個實驗輔助說明穿插在有關實驗中,如微升量級樣品的透析、雜交膜的選擇、常見蛋白酶抑製劑的使用與保存、包涵體蛋白的復性、融閤標簽的切割、Ni填料的再生、顯色後NC膜上蛋白質條帶的再利用、免疫印跡中的ECL檢測法、激發光譜與發射光譜等。③內容編寫精練、易懂,實用性強。《現代蛋白質實驗技術》編者為具有多年實驗教學經驗的教師和掌握蛋白質先進技術的科研人員,其通力閤作保證瞭實驗教材的編寫質量。該書適閤作為生命科學專業高年級本科生實驗教材,也適閤生命科學相關專業研究生使用。

評分

隻是初級的大學工具書,讓人失望

評分

正版不錯

評分

《現代蛋白質實驗技術》有以下幾個特點:①實驗項目內容充實,技術先進。所選實驗項目主要來自編寫者多年的教學經驗和科研積纍,除傳統蛋白質實驗技術如SDS-PAGE、免疫印跡、雙嚮電泳、離子交換層析、凝膠過濾、親和層析、酶動力學分析等外,還包括凝膠阻滯電泳、質譜技術、酵母雙雜交、Pull—down、Far—western、雙分子熒光互補、蛋白質體外磷酸化、蛋白質結晶、抗體純化、藥物篩選等。②實驗技術信息量豐富,參考價值高。書中除瞭39個實驗項目外,還有針對性地編寫瞭33個實驗輔助說明穿插在有關實驗中,如微升量級樣品的透析、雜交膜的選擇、常見蛋白酶抑製劑的使用與保存、包涵體蛋白的復性、融閤標簽的切割、Ni填料的再生、顯色後NC膜上蛋白質條帶的再利用、免疫印跡中的ECL檢測法、激發光譜與發射光譜等。③內容編寫精練、易懂,實用性強。《現代蛋白質實驗技術》編者為具有多年實驗教學經驗的教師和掌握蛋白質先進技術的科研人員,其通力閤作保證瞭實驗教材的編寫質量。該書適閤作為生命科學專業高年級本科生實驗教材,也適閤生命科學相關專業研究生使用。

評分

《現代蛋白質實驗技術》有以下幾個特點:①實驗項目內容充實,技術先進。所選實驗項目主要來自編寫者多年的教學經驗和科研積纍,除傳統蛋白質實驗技術如SDS-PAGE、免疫印跡、雙嚮電泳、離子交換層析、凝膠過濾、親和層析、酶動力學分析等外,還包括凝膠阻滯電泳、質譜技術、酵母雙雜交、Pull—down、Far—western、雙分子熒光互補、蛋白質體外磷酸化、蛋白質結晶、抗體純化、藥物篩選等。②實驗技術信息量豐富,參考價值高。書中除瞭39個實驗項目外,還有針對性地編寫瞭33個實驗輔助說明穿插在有關實驗中,如微升量級樣品的透析、雜交膜的選擇、常見蛋白酶抑製劑的使用與保存、包涵體蛋白的復性、融閤標簽的切割、Ni填料的再生、顯色後NC膜上蛋白質條帶的再利用、免疫印跡中的ECL檢測法、激發光譜與發射光譜等。③內容編寫精練、易懂,實用性強。《現代蛋白質實驗技術》編者為具有多年實驗教學經驗的教師和掌握蛋白質先進技術的科研人員,其通力閤作保證瞭實驗教材的編寫質量。該書適閤作為生命科學專業高年級本科生實驗教材,也適閤生命科學相關專業研究生使用。

評分

《現代蛋白質實驗技術》有以下幾個特點:①實驗項目內容充實,技術先進。所選實驗項目主要來自編寫者多年的教學經驗和科研積纍,除傳統蛋白質實驗技術如SDS-PAGE、免疫印跡、雙嚮電泳、離子交換層析、凝膠過濾、親和層析、酶動力學分析等外,還包括凝膠阻滯電泳、質譜技術、酵母雙雜交、Pull—down、Far—western、雙分子熒光互補、蛋白質體外磷酸化、蛋白質結晶、抗體純化、藥物篩選等。②實驗技術信息量豐富,參考價值高。書中除瞭39個實驗項目外,還有針對性地編寫瞭33個實驗輔助說明穿插在有關實驗中,如微升量級樣品的透析、雜交膜的選擇、常見蛋白酶抑製劑的使用與保存、包涵體蛋白的復性、融閤標簽的切割、Ni填料的再生、顯色後NC膜上蛋白質條帶的再利用、免疫印跡中的ECL檢測法、激發光譜與發射光譜等。③內容編寫精練、易懂,實用性強。《現代蛋白質實驗技術》編者為具有多年實驗教學經驗的教師和掌握蛋白質先進技術的科研人員,其通力閤作保證瞭實驗教材的編寫質量。該書適閤作為生命科學專業高年級本科生實驗教材,也適閤生命科學相關專業研究生使用。

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