分子生物學實驗原理與技術 pdf epub mobi txt 電子書 下載 2025

簡體網頁||繁體網頁

☆☆☆☆☆

任林柱，張英 著，任林柱，張英 編

圖書標籤:

• 分子生物學
• 生物技術
• 實驗指導
• 生物化學
• 基因工程
• DNA
• RNA
• 蛋白質
• 細胞生物學
• 生物科學

齣版社： 科學齣版社

ISBN：9787030449269

版次：1

商品編碼：11728480

包裝：平裝

叢書名： 普通高等教育“十二五”規劃教材

開本：16開

齣版時間：2015-06-01

用紙：膠版紙

頁數：208

字數：297000

正文語種：中文

編輯推薦

適讀人群 ：可用於高等院校生物、醫藥學科各專業本科生和研究生的分子生物學實驗指導教材，同時也可作為從事相關領域的教學、科研人員的一本有益的參考書。
書中所列的實驗流程均是編者們正在使用的、在教學中進行過實踐的、切實可行的方法；所列常見問題及注意事項均是多年科研工作及教學實踐的總結積纍。

內容簡介

前言
實驗一DNA的提取1
實驗二核酸的定量8
實驗三真核細胞總RNA的提取11
實驗四PCR擴增目的基因17
實驗五RT-PCR25
實驗六DNA瓊脂糖凝膠電泳31
實驗七從瓊脂糖凝膠中迴收DNA片段36
實驗八目的基因片段與載體的連接39
實驗九用氯化鈣法製備新鮮的大腸杆菌感受態細胞42
實驗十重組DNA的轉化44
實驗十一DNA酶切48
實驗十二轉化剋隆的篩選和鑒定52
實驗十三質粒DNA的分離純化55
實驗十四含甘油培養物保藏法65
實驗十五Southernblot分析67
實驗十六Northernblot分析74
實驗十七實時定量PCR技術78
實驗十八環介導等溫擴增技術87
實驗十九mRNA差異顯示技術93
實驗二十外源基因在大腸杆菌中的誘導錶達97
實驗二十一SDS-PAGE檢測蛋白質的錶達100
實驗二十二Westernblot檢測蛋白質的錶達107
實驗二十三雙嚮電泳技術114
實驗二十四DNA甲基化的檢測138
實驗二十五哺乳動物細胞中的RNA乾擾技術141
實驗二十六小鼠血漿microRNA提取技術144
實驗二十七DNA芯片技術檢測病原147
實驗二十八TALEN載體的設計與構建149
實驗二十九TALEN定點製備及篩選突變體155
實驗三十CRISPR/Cas9介導的基因組定點編輯技術157
主要參考文獻163
附錄166

作者簡介

吉林大學一綫教師

內頁插圖

目錄

《分子生物學實驗原理與技術實驗》共列三十個分子生物學實驗及其相關附錄，內容不僅涵蓋瞭基因剋隆、基因錶達、核酸及蛋白分子雜交等分子生物學常規實驗，也包括基因檢測、基因打靶、RNA乾擾、蛋白分析等新型的分子生物學技術。每個實驗包括原理介紹、實驗操作、常見問題及注意事項。在介紹原理和流程過程中，穿插一些實用的重點提示、試劑作用及可能齣現的現象。《分子生物學實驗原理與技術實驗》所列的實驗流程均是編者們正在使用的、在教學中進行過實踐的、切實可行的方法；所列常見問題及注意事項均是多年科研工作及教學實踐的總結積纍。

精彩書摘

實驗一DNA的提取
【實驗目的】
瞭解DNA提取的基本原理，掌握DNA的提取方法
【實驗原理】
遺傳信息全部儲存在DNA -級結構之中，製備DNA的原則是既要將DNA與蛋白質脂類和糖類等分離，又要保持DNA分子的完整
一分離純化DNA的原則
(l)保持DNA分子一級結構的完整性溫度不要過高;控製一定的pH範圍(pH5~9)，保持一定的離子強度，減少物理因素對核酸降解的機械剪切力
(2)防止DNA的生物降解細胞內或外來的各種核酸酶能消化核酸鏈中的磷酸二酯鍵，破壞核酸一級結構因此，所用器械和一些試劑需要高溫滅菌，提取緩衝液中也需要加核酸酶抑製劑
二分離提取核酸的主要步驟
(一)細胞的破碎
細胞破碎的常用方法有以下幾種
(l)高速組織搗碎機搗碎;
(2)玻璃勻漿器勻漿;
(3)超聲波處理法;
(4)液氮研磨法;
(5)化學處理法(SDSTween-80等);
(6)生化法(溶菌酶縴維素酶等)
(二)核蛋白的解聚變性蛋白的去除
核酸與蛋白質的結閤力主要是正負靜電吸力(核酸與堿性蛋白的結閤)氫鍵和非極性的範德華力分離核酸最睏難的是將與核酸緊密結閤的蛋白質分開，同時避免核酸降解
提取DNA的一般過程足將分散好的組織細胞在含SDS(十二烷基硫酸鈉)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白質，再用酚和氯仿/異戊醇抽提分離蛋白質，得到的DNA溶液再經過乙醇沉澱，使DNA從溶液中析齣
蛋白酶K能在SDS和EDTA-2Na存在下保持很高的活性在勻漿後提取DNA的反應體係中，SDS可破壞細胞膜核膜，並使組織蛋白與DNA分離，EDTA-2Na則抑製細胞中DNA酶(DNase)的活性;而蛋白酶K可將蛋白質降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分離齣來
常見的DNA酶抑製劑如下:
(l)金屬離子螯閤劑DNA酶需要金屬二價離子Mg2+Cap_的激活，因此使用金屬二價離子螯閤劑，可抑製DNA酶活性如EDTA-2Na等
(2)陰離子型錶麵活性劑如SDS，該試劑除對核酸酶有抑製作用外，還能使蛋白質變性，並與變性蛋白結閤成帶負電荷的復閤物，該復閤物在高鹽溶液中易於沉澱
常用DNA提取原理如下
(l)加入10倍體積的緩衝液:10 mmol/L Tris-HCI (pH 7.4)，150 mmol/L NaCI，10 mmol/L EDTA，0.50/ SDS其中，NaCI破壞核酸一蛋白質間的靜電引力，使氫鍵破壞，核蛋白解聚;EDTA破壞細胞膜螯閤Ca2_，使DNase失活;SDS可破壞細胞膜抑製核酸酶，還可使核酸從蛋白質上遊離m來
(2)加入蛋白酶K蛋白酶K是一種非特異性蛋白酶，它可將蚤白質消化成氨基酸一般工作濃度是50--100 ug/mL反應時間大於5h，反應溫度55℃
(三)核酸的沉澱
沉澱是濃縮核酸最常用的方法優點:改變核酸的溶解緩衝液;重新調整核酸的濃度;去除溶液中某些鹽離子與雜質
1.常見的用於DNA沉澱的鹽類及濃度(錶1-1)
2.有機沉澱劑
(1)乙醇優點:對鹽類沉澱少，沉澱中所含少量乙醇易揮發除去缺點:需要量大(2~3倍體積)
(2)異丙醇優點:需體積小，速度快，適於濃度低體積大的DNA樣品沉澱一般不需低溫長時間放置缺點:易使鹽類蔗糖與DNA共沉澱;異丙醇難以揮發除去
(3)聚乙二醇(PEG)優點:可用不同濃度的PEG選擇沉澱不同相對分子質量的DNA片段應用PEG600進行DNA沉澱時，使用濃度與DNA片段的大小成反比注意:PEG沉澱一般需要加入0.5 mol/L的NaCI或10 mmol/L的MgClp;
(4)精胺(spermine)精胺不是有機溶劑，但可快速有效沉澱DNA原理:精胺與DNA結閤後，使DNA在溶液中結構凝縮而發生沉澱，並可使單核苷酸和蛋白質雜質與DNA分開，達到純化DNA的目的
3.核酸沉澱的溫度和時間
核酸沉澱應該在低溫下長時間進行若溶液中核酸濃度很高，在鹽離子存在的情況下，加入異丙醇等後即可看到DNA的絮狀沉澱若溶液中核酸濃度很低，則需在-20℃條件下過夜酵母tRNA可有助納剋(ng)級的核酸沉澱大於10 ltg/mL的核酸，冰浴10 min即可有效沉澱
(四)核酸的保存
1.DNA
DNA樣品溶於pH 8.O的TE緩衝液中，4℃或-20℃保存，或者加1滴氯仿-70℃可保存數年
2.RNA
(l) RNA樣品溶於含0.3 mol/L NaAc (pH 5.2)的2倍體積的乙醇中，-70℃保存
(2)在RNA溶液中加1滴氯仿或0.2 mol/L VRC(氧釩核糖核苷復閤物)凍存於-70℃，可保存數年
(五)常見基因組DNA提取方法
1.基因組DNA提取-CTAB法(植物DNA提取經典方法)
十六烷基三甲基溴化銨( hexadecVlt rimethvlammoniumbro mide，CTAB)是一種陽離子去汙劑，可溶解細胞膜，並與核酸形成復閤物該復閤物在高鹽溶液中(>0.7 mol/LNaCI)是可溶的，通過有機溶劑抽提，去除蛋白質多糖酚類等雜質盾加入乙醇沉澱即可使核酸分離m來CTAB提取緩衝液經典配方及改進配方見錶1-2和錶1 3
錶1-2CTAB提取緩衝液的經典配方
錶1-3CTAB提取緩衝液的改進配方
CTAB窪實驗流程見圖1-1
2.基因組DNA提取——SDS法
SDS是一種陰離子去垢劑，在高溫(55--65℃)條件下能裂解細胞，使染色體離析，蛋白質變性，釋放齣核酸;然後，提高鹽(KAc或NHd Ac)濃度並降低溫度(冰浴)，使蛋白質及多糖雜質沉澱，離心後除去沉澱;上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反復抽提後用乙醇沉澱水相中的DNA
SDS法適用於大部分實驗材料的基因組DNA提取，如動物組織細胞全血細菌SDS法實驗流程見圖1-2(以動物組織為例)
圖1-2SDS法實驗流程
(六)幾種常見細胞或組織DNA的提取
1.細菌基因組DNA的製備過程
(l)細胞裂解0.6倍體積的異丙醇或2倍體積乙醇(可以加入1/10體積的3 mol/L乙酸銨輔助沉澱)
(2)DNA純化CTAB除去多糖，酚氯仿一異戊醇除去蛋白質
(3)沉澱DNA10% SDS和蛋白酶K
2.哺乳動物細胞基因組DNA的抽提過程
(l)組織粉碎動物組織剪成小塊，置液氮中凍結後研磨成細粉末;組織培養的細胞用胰酶消化鬆散後直接使用
(2)細胞裂解0.5% SDS和0.1 mg/mL蛋白酶K，50℃溫育
(3)沉澱DNA用2倍體積的無水乙醇或0.6倍體積的異丙醇(加入1/10體積的3 mol/L乙酸銨可以輔助沉澱)
3.從植物組織中製備DNA
(l)組織粉碎用液氮冷凍後研磨成細粉末
(2)細胞裂解用20/ CTAB/13-ME(十六烷基三甲基溴化銨/p巰基乙醇)或l%SDS和蛋白酶K，65℃溫育
(3)沉澱DNA:用0.6倍體積的異丙醇(-20℃)(可以加入1/10體積的3 mol/L乙酸銨輔助沉澱)
【實驗用品】
1.材料
動物組織
2.器材和儀器
(1)恒溫水浴鍋
(2)颱式離心機
(3)紫外分光光度計
(4)移液器
(5)玻璃勻漿器
(6)離心管(滅菌)
(7)吸頭(滅菌)等
3.試劑
(l)細胞裂解緩衝液
Tris(pH 8.O)100 mmol/L EDTA (pH 8.O)500 mmol/L
NaCI20 mmol/L
SDS100
胰RNA酶20 ltg/mL
(2)蛋白酶K稱取20mg蛋白酶K溶於1mL滅菌的雙蒸水中，-20℃備用
(3)TE緩衝液(pH 8.O)高壓滅菌，室溫保存
(4)酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)
(5)異丙醇
(6)預冷無水乙醇
(7)70g乙醇
(8)滅菌水
(9)TIANamp Genomic DNA kit (DP304)斌劑盒
【實驗內容】
1.方法一
(l)取新鮮或冰凍動物組織塊0.19(0.5 cm:i)，盡量剪碎置於研鉢研碎，加入1 mL的細胞裂解緩衝液勻漿至不見組織塊，轉入1.5mL離心管中，加入蛋白酶K(500 ljg/mL)20 ljL，混勻在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min(也可轉入37℃水浴12~24 h)，間歇振蕩離心管數次在颱式離心機上，以12000g離心5min，取上清液人另一離心管中
(2)加2倍體積異丙醇，倒轉混勻後，可以看見絲狀物，用100 LiL吸頭挑齣，晾乾，用200 ljL TE重新溶解(可進行PCR反應等，需要進一步純化的按下列步驟進行)
(3)加等量的酚/氯仿/異戊醇振蕩混勻，12000g離心5 min
(4)取上層溶液至另一管，加入等體積的酚/氯仿/異戊醇，振蕩混勻，12000g離心，5min
(5)取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5 mol/L乙酸銨和2倍體積的無水乙醇，混勻後室溫沉澱2 min，12000g離心10min
(6)小心倒掉上清液，將離心管倒置於吸水紙上，將附於管壁的殘餘液滴除掉
(7)用1 mL 70%乙醇洗滌沉澱物1次，12000 9離心5 min
(8)小心倒掉上清液，將離心管倒置於吸水紙上，將附於管壁的殘餘液滴除掉，室溫乾燥
(9)加200 UL TE重新溶解沉澱物，然後置於4℃或-20℃保存備用
(10)吸取適量樣品於紫外分光光度計上檢測濃度和純度
2.方法二
使用TIANamp Genomic DNA kit (DP 304)誠劑盒提取DNA
(l)動物組織(小於10mg)用液氮研磨後，加入200 FiL緩衝液GA，振蕩至徹底懸浮
(2)加入20uL蛋白酶K溶液(20 mg/mL)，混勻，56℃放置，直到組織溶解
(3)加入200uL緩衝液GB，充分顛倒混閤，70℃放置10min，直到溶液變清亮
(4)加入200uL無水乙醇，充分振蕩混閤15s
(5)將所有溶液及絮狀沉澱加入到吸附柱CB 3中(吸附柱放人收集管中)，12 000g離心30s，棄濾液，將吸附柱放迴收集管中
(6)嚮吸附柱中加入500uL緩衝液GD，12000g離心30s，棄濾液，將吸附柱放迴到收集管中
(7)嚮吸附柱中加入700uL漂洗液PW，12000g離心30s，棄濾液，將吸附柱放迴到收集管中
(8)嚮吸附柱中加入500uL漂洗液PW，12000g離心30s，棄濾液，將吸附柱放迴到收集管中
(9)將吸附柱放迴收集管中，12 000g離心2min;
(10)將吸附柱放到一個乾淨離心管中，加入 TE緩衝液，室溫放置3min，離心2min，收集到的溶液即為DNA溶液
【注意事項】
(l)選擇的實驗材料要新鮮，處理時間不要過長
(2)在加入細胞裂解緩衝液前，細胞必須均勻分散，以減少DNA團塊形成
(3)提取的DNA不易溶解，可能的原因:DNA不純，含雜質較多;加溶解液太少使濃度過大;沉澱物太乾燥，也會使溶解變得很睏難
(4)電泳檢測時DNA成塗布狀，可能的原因:操作不慎;汙染核酸酶等

前言/序言

《生命藍圖的探索：從基因到蛋白質的奧秘》 本書並非一本嚴謹的教科書，而是一次關於生命本質的深入訪談，一次對那些微小卻強大到足以塑造宇宙的物質的追問。它不是冷冰冰的公式和操作指南，而是試圖用通俗易懂的語言，描繪齣生命最核心的運作機製，揭示那些隱藏在DNA、RNA和蛋白質之間，構成萬物生長的秘密。 我們常常驚嘆於生命的奇跡：為什麼相似的基因可以産生截然不同的個體？為什麼一場小小的感冒就能讓我們的身體做齣劇烈的反應？為什麼有些疾病會代代相傳？這些問題的答案，都藏在分子這一微觀世界。本書將帶領您潛入這個看不見的領域，去理解那些驅動生命進程的分子如何協同工作，如何傳遞信息，如何製造構建生命體的“磚瓦”。 第一章：遺傳信息的載體——DNA的舞蹈 想象一下，在細胞的深處，有一個微小的檔案館，裏麵保存著生命的全部藍圖。這個檔案館就是DNA，它以一種令人驚嘆的精確性和穩定性，將生命的遺傳信息一代代傳遞下去。我們將一起揭開DNA的雙螺鏇結構之謎，理解堿基配對的規律，以及DNA是如何自我復製，確保生命的延續。這不是一個死闆的化學分子描述，而是將其比作一本精巧的代碼本，記錄著生命從齣生到衰老，從生長到繁衍的每一個指令。我們會探討DNA在細胞核中的“住所”，它如何在染色體這個更宏大的結構中安身立命，以及它與細胞核膜之間微妙的互動。 第二章：信息的傳遞者——RNA的使命 DNA手中的藍圖，並非直接用來建造生命體，它需要一個臨時的信使來傳遞指令。這個信使，就是RNA。RNA就像是DNA藍圖的復印件，它將DNA中的遺傳信息帶齣細胞核，前往細胞質，在那裏，這些信息將被翻譯成生命活動的具體執行者。我們將介紹RNA的不同類型，如信使RNA（mRNA）、轉運RNA（tRNA）和核糖體RNA（rRNA），它們各自扮演著怎樣的角色，如何相互協作，完成從DNA到蛋白質的“信息接力”。這裏，RNA的旅程被描繪成一次穿越細胞工廠的運輸任務，每一種RNA都擁有獨特的“交通工具”和“裝載貨物”，將指令精準地送到目的地。 第三章：生命工匠——蛋白質的韆姿百態 如果說DNA是藍圖，RNA是信使，那麼蛋白質就是真正建造和維護生命體的“工匠”。它們形態各異，功能萬韆，從加速化學反應的酶，到支撐身體結構的膠原蛋白，再到傳遞信號的激素，幾乎無所不能。本書將深入探討蛋白質的氨基酸序列如何決定其三維結構，而三維結構又如何賦予其特定的功能。我們會像欣賞藝術品一樣，去理解蛋白質的摺疊之美，以及這種摺疊的精確性如何關係到生命的正常運作。蛋白質並非靜態的雕塑，它們是動態的、有活力的實體，通過與外界的相互作用，不斷地執行著生命賦予它們的任務。 第四章：基因錶達的調控——生命的精妙指揮 生命並非一成不變，細胞會根據環境的變化和自身的需求，靈活地調整基因的錶達。這就好比一個精明的指揮傢，在不同的場閤，奏響不同的樂章。我們將探討基因是如何被“開啓”或“關閉”的，有哪些因子參與瞭這個過程，以及這些調控機製如何確保細胞在閤適的時機，以閤適的方式，産生所需的蛋白質。這裏，我們不僅僅是描述開關，更是解析指揮傢如何發齣信號，如何協調各個部門，確保整個生命樂團和諧運轉。 第五章：分子診斷與治療的曙光 理解瞭生命分子的運作規律，我們就能找到解決生命“故障”的鑰匙。本書將簡要勾勒齣分子生物學如何應用於疾病的診斷和治療。從基因測序揭示疾病的根源，到基因工程靶嚮治療，再到利用生物技術製造藥物，分子生物學正以前所未有的力量，守護著人類的健康。我們將在輕鬆的筆觸下，展望分子技術如何幫助醫生“看到”潛藏的疾病，如何為患者量身定製“特效藥”，以及如何為我們描繪一個更健康的未來。 本書特點： 非技術性敘述： 避免使用過多晦澀的專業術語，力求將復雜的科學概念以清晰、生動的語言呈現。 類比與隱喻： 運用生活化的類比和生動的隱喻，幫助讀者建立直觀的理解，將抽象的分子過程具象化。 故事性導嚮： 以探索生命奧秘為主綫，將科學知識融入引人入勝的敘述之中，讓讀者在閱讀中感受到科學的魅力。 關注“為什麼”： 不僅僅停留在“是什麼”，更側重於解釋“為什麼會這樣”，引導讀者思考生命過程背後的邏輯和機製。 人文關懷： 在介紹科學知識的同時，也融入對生命價值的思考，以及對未來科技發展可能帶來的影響的展望。 《生命藍圖的探索：從基因到蛋白質的奧秘》並非一本要求您成為生物學傢的書，它是一次邀請，邀請您一同好奇，一同驚嘆，一同去理解我們自身以及我們所處的世界，是如何以如此精妙的方式運作的。它是一扇窗，透過這扇窗，您將看到一個充滿活力、不斷演變的微觀宇宙，而這個宇宙，恰恰是我們存在的根基。

評分☆☆☆☆☆

在《分子生物學實驗原理與技術》這本書中，我驚喜地發現，它對核酸提取與純化技術的講解，遠超我的預期。這看似簡單的前處理步驟，實則對後續的各種分子生物學實驗有著至關重要的影響。書中不僅介紹瞭傳統酚-氯仿抽提法、離心柱純化法等多種技術，還對每種方法的原理、操作流程、優缺點以及適用範圍進行瞭詳盡的比較。我特彆關注書中關於RNA提取的部分，它強調瞭RNA的易降解性，以及如何通過使用RNA酶抑製劑、快速操作以及在低溫條件下進行實驗來最大程度地保護RNA的完整性。書中對基因組DNA提取也做瞭深入的闡述，包括如何去除蛋白、多糖等雜質，以獲得高純度的DNA。這些細緻入微的講解，讓我意識到，即使是基礎實驗，也需要嚴謹的操作和深刻的理解。

評分☆☆☆☆☆

《分子生物學實驗原理與技術》中關於基因編輯技術的章節，簡直就是打開瞭一扇新的大門。CRISPR-Cas9係統自從問世以來，就以前所未有的效率和精確度顛覆瞭基因研究領域。我花瞭很多時間仔細研讀瞭書中關於CRISPR-Cas9係統的工作原理，包括嚮導RNA（gRNA）如何特異性地引導Cas9核酸酶到目標DNA位點，以及Cas9如何産生DNA雙鏈斷裂。書中還詳細介紹瞭如何設計gRNA以獲得高編輯效率，以及如何處理DNA雙鏈斷裂後細胞自身的修復機製，如非同源末端連接（NHEJ）和同源重組（HR），這些機製如何導緻基因的插入、刪除或替換。讓我感到興奮的是，書中也討論瞭CRISPR-Cas9技術的應用場景，從基礎研究中的基因功能探究，到疾病治療的潛力，都進行瞭前瞻性的探討，這無疑為我們未來的研究方嚮提供瞭重要的啓示。

評分☆☆☆☆☆

我必須強調，《分子生物學實驗原理與技術》中關於生物信息學在分子生物學實驗中的應用部分，為我打開瞭新的研究思路。實驗數據的産生隻是第一步，如何從海量的數據中提取有用的信息，如何進行解讀和分析，纔是真正考驗研究者能力的環節。書中對常用的生物信息學數據庫，如NCBI、Ensembl等，進行瞭介紹，並講解瞭如何利用這些數據庫來查詢基因序列、蛋白質結構、物種進化信息等。更重要的是，書中對常用的生物信息學分析工具，例如序列比對工具（BLAST）、基因預測工具、係統發育分析軟件等，都進行瞭基本的講解和應用示例。這讓我意識到，掌握一定的生物信息學知識和技能，對於高效地設計實驗、解讀結果、甚至提齣新的研究假設，是多麼重要。

評分☆☆☆☆☆

《分子生物學實驗原理與技術》在處理“單細胞技術”這一前沿領域時，展現齣瞭其與時俱進的特點。在過去，我們總是習慣於對大量細胞進行平均化的分析，而單細胞技術則允許我們深入到每一個細胞的個體層麵。書中對於單細胞RNA測序（scRNA-seq）的原理和技術的介紹，讓我印象深刻。它詳細講解瞭如何從組織或細胞懸液中分離單個細胞，如何捕獲細胞內的RNA，如何對RNA進行逆轉錄和擴增，以及如何利用高通量測序技術來分析每個細胞的轉錄組特徵。書中還探討瞭單細胞技術的應用，例如揭示細胞異質性、發現新的細胞亞群、追蹤細胞發育軌跡等，這無疑為我們研究復雜生物係統提供瞭前所未有的視角和工具。

評分☆☆☆☆☆

《分子生物學實驗原理與技術》對於構建基因錶達載體這部分內容，我真是受益匪淺。在我看來，一個精心設計的錶達載體，是實現基因功能研究和蛋白質錶達的關鍵。書中不僅僅是簡單地介紹瞭質粒、病毒載體等載體類型，更是詳細闡述瞭構建載體時需要考慮的各個元件，例如啓動子、選擇標記基因、多剋隆位點（MCS）以及其他調控元件。我記得書中對啓動子的選擇做瞭非常細緻的分析，包括組成型啓動子、誘導型啓動子以及組織特異性啓動子，並給齣瞭不同載體係統中啓動子性能的比較。此外，書中對如何將目標基因插入載體，以及如何驗證載體構建的正確性，比如通過限製性酶切分析和測序，都進行瞭詳盡的指導，這為我未來的基因工程實驗奠定瞭堅實的基礎。

評分☆☆☆☆☆

《分子生物學實驗原理與技術》一書中關於基因錶達調控的內容，讓我眼前一亮。長期以來，我一直對細胞如何精確地“決定”哪些基因在何時何地錶達感到好奇，而這本書則為我揭示瞭其中的奧秘。它不僅僅介紹瞭轉錄因子、啓動子、增強子等基本概念，更深入地探討瞭不同調控機製的協同作用。比如，書中對組蛋白修飾和DNA甲基化的論述，就讓我深刻理解瞭錶觀遺傳學在基因錶達調控中的關鍵作用。我記得它詳細介紹瞭乙酰化、甲基化、磷酸化等修飾如何影響染色質的結構，從而調控DNA的可及性，進而影響轉錄的發生。此外，書中還對miRNA、siRNA等小分子RNA在轉錄後調控中的作用進行瞭精彩的闡述，它們如何與靶標mRNA結閤，導緻mRNA降解或翻譯抑製，這些內容為理解基因錶達的復雜性提供瞭更深層次的視角。

評分☆☆☆☆☆

在閱讀《分子生物學實驗原理與技術》時，我被其中對PCR技術的深入剖析深深吸引。這不僅僅是簡單的“加什麼引物，加什麼酶”的羅列，而是對聚閤酶鏈式反應（PCR）核心機製的層層剝離，從DNA模闆的變性、引物的退火，到DNA聚閤酶的延伸，每一個環節的溫度控製、時間設定，甚至緩衝液的成分，都進行瞭詳盡的解釋。更讓我驚喜的是，書中還探討瞭不同類型的PCR，例如反轉錄PCR（RT-PCR）、實時定量PCR（qPCR）以及巢式PCR等，並對它們各自的適用場景、實驗設計要點以及潛在的乾擾因素進行瞭詳細的討論。這讓我意識到，看似簡單的PCR反應背後，蘊含著如此多的科學智慧和技術考量。我特彆欣賞書中關於優化PCR條件的章節，它列舉瞭多種可能影響擴增效率的變量，並提供瞭係統性的解決方案，例如通過改變退火溫度、優化Mg²⁺濃度，甚至調整DNA聚閤酶的用量來提高特異性和産量。

評分☆☆☆☆☆

我特彆喜歡《分子生物學實驗原理與技術》中關於蛋白質研究的部分。蛋白質是生命活動的主要執行者，理解它們的結構、功能以及相互作用，是揭示生命機製的關鍵。這本書從蛋白質的分離、純化，到鑒定和定量，提供瞭一套完整的技術體係。我記得書中對SDS-PAGE和Western Blotting技術的描述非常詳盡，不僅講解瞭原理，還包括瞭實驗步驟的細節，例如凝膠的配製、電泳的電壓和時間選擇，以及抗體的選擇、孵育條件和信號檢測方法。讓我印象深刻的是，書中還探討瞭如何通過蛋白質印跡技術來檢測特定蛋白質的錶達水平和分子量，並對實驗中可能遇到的假陽性、假陰性等問題提供瞭排除方法。此外，書中對ELISA（酶聯免疫吸附測定）的應用也做瞭深入的介紹，展示瞭其在定量檢測蛋白質方麵的靈活性和高通量潛力。

評分☆☆☆☆☆

《分子生物學實驗原理與技術》這本書，說實話，我是帶著一種近乎朝聖的心情去翻閱的。作為一個在生物學領域摸爬滾打多年的老兵，我深知分子生物學研究的嚴謹性與挑戰性。當我們談論“原理與技術”時，腦海中浮現的不僅僅是冰冷的試劑、復雜的儀器，更是那些支撐起無數突破性發現的底層邏輯和精妙的設計。我特彆關注那些關於分子剋隆的章節，比如限製性內切酶的應用，我記得書中非常詳細地闡述瞭不同酶的識彆序列、切割位點以及如何根據這些信息設計剋隆策略。不僅僅是理論上的介紹，書中還穿插瞭大量實際操作的細節，比如如何優化酶切效率，如何處理粘性末端與平末端，甚至是如何在瓊脂糖凝膠電泳中準確地迴收目標DNA片段。這些細節對於初學者來說至關重要，而對於有經驗的實驗者而言，也能從中找到提升實驗成功率的靈感。

評分☆☆☆☆☆

這本書中關於DNA測序技術的章節，絕對是乾貨滿滿。我一直對能夠讀取生命密碼的DNA測序技術充滿好奇，而《分子生物學實驗原理與技術》則為我提供瞭深入瞭解的機會。書中不僅介紹瞭經典的桑格測序法，包括其原理、步驟以及分辨率，還重點闡述瞭新一代測序（NGS）技術，例如高通量測序（HTS）的幾種主流平颱，如Illumina、Ion Torrent等。我特彆欣賞書中對NGS工作流程的詳細描述，從文庫構建、橋式PCR擴增，到邊閤成邊測序（SBS）的原理，再到海量數據的比對和分析，都進行瞭條理清晰的講解。書中還探討瞭NGS在基因組學、轉錄組學、錶觀基因組學等領域的廣泛應用，例如全基因組測序、外顯子組測序、RNA測序等，這為我理解宏大的生命科學研究提供瞭重要的技術支撐。

評分☆☆☆☆☆

good

評分☆☆☆☆☆

啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊

評分☆☆☆☆☆

賣傢很好，快遞也很快。好評。

評分☆☆☆☆☆

說實話，纔看瞭其中幾個實驗，就已經有錯誤的瞭，不知道是不是盜版

評分☆☆☆☆☆

說實話，纔看瞭其中幾個實驗，就已經有錯誤的瞭，不知道是不是盜版

評分☆☆☆☆☆

很好的一本書，想學相關內容的可以購買

評分☆☆☆☆☆

書的內容還不錯

評分☆☆☆☆☆

不錯不錯不錯哦

評分☆☆☆☆☆

非常不錯，正品無疑，物流很快。