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郭鑫 编

图书标签:

• 动物免疫学
• 免疫学实验
• 兽医学
• 实验教程
• 动物科学
• 生物科学
• 教学参考
• 高等教育
• 实验室
• 实践教学

出版社： 中国农业大学出版社

ISBN：9787811171709

版次：1

商品编码：10347732

包装：平装

开本：16开

出版时间：2007-03-01

用纸：胶版纸

页数：167

字数：269000

内容简介

本实验教程对各类免疫学实验操作进行了详细介绍书中涉及的内容与《动物免疫学》教材相匹配。全书共分为7章36个实验，既包含传统的动物免疫学实验技术，又突出了新的免疫学检测方法。每类实验技术包括若干实验项目，便于各层次的学生选用。《动物免疫学实验教程》突出了实验原理和注意事项的分量，强调了关键技术及操作中可能引起失败的原因。主要内容包括免疫制备技术、凝集实验、沉淀实验、免疫标记技术、补体参与的实验、中和实验等。

目录

动物免疫学实验目的和要求
实验室规则
实验记录与实验报告撰写要求
第一章 免疫制备技术
概述
实验一 抗原的制备
实验二 多克隆抗体的制备
实验三 单克隆抗体的制备
实验四 抗体的纯化
实验五 荧光抗体的制备
实验六 酶标抗体的制备
实验七 淋巴细胞的制备

第二章 凝集实验
概述
实验八 直接凝集实验
实验九 间接凝集实验
实验十 乳胶凝集实验
实验十一 血凝和血凝抑制实验

第三章 沉淀实验
概述
实验十二 环状沉淀实验
实验十三 絮状沉淀实验
实验十四 琼脂免疫扩散实验
实验十五 免疫电泳实验
实验十六 对流免疫电泳实验
实验十七 火箭免疫电泳实验

第四章 免疫标记技术
概述
实验十八 免疫荧光抗体技术
实验十九 酶联免疫吸附实验
实验二十 斑点-酶联免疫吸附实验
实验二十一 免疫酶组化实验
实验二十二 放射免疫技术
实验二十三 化学发光免疫分析
实验二十四 免疫胶体金标记技术
实验二十五 生物素-亲和素免疫检测技术
实验二十六 免疫印迹技术

第五章 补体参与的实验
概述
实验二十七 补体结合实验
实验二十八 溶血空斑实验

第六章 中和实验
概述
实验二十九 终点法中和实验
实验三十 空斑减少法中和实验

第七章 细胞免疫检测技术
概述
实验三十一 E玫瑰花环形成实验
实验三十二 T淋巴细胞亚群检测技术
实验三十三 淋巴细胞转化实验
实验三十四 酸性醋酸萘酯酶测定
实验三十五 细胞毒性T淋巴细胞活性测定
实验三十六 细胞凋亡的DNA琼脂糖凝胶电泳分析
参考文献

精彩书摘

买验一抗原的制备
【实验目的和要求】
熟悉颗粒性抗原、可溶性抗原及半抗原的制备方法和基本思路。
【实验原理】
能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答，并能与相应免疫应答产物，即抗体和致敏淋巴细胞，在体内外发生特异性反应的物质称为抗原或免疫原。前一种性能称为免疫原性，后一种性能称为反应原性。凡是具有这两种性质的物质称为完全抗原，如大多数蛋白质、细菌、病毒等。只具备反应原性而无免疫原性的物质称为半抗原或不完全抗原，如大多数多糖、类脂和某些药物。抗原按其来源可分为外源性抗原和内源性抗原，外源性抗原又可分为天然抗原、人工抗原、合成抗原与基因工程重组抗原。绝大多数天然抗原不是单一成分，在制备抗体时可按需要进行纯化。将半抗原或合成肽通过与载体蛋白连接制备成的具有免疫原性的化合物，分别称为人工抗原和合成抗原。
抗原的制备包括完全抗原的制备和人工抗原的制备，主要用于制造免疫用疫苗或进行抗体的检测。针对不同的抗原特性可以选择不同的制备方法。抗原的制备工作涉及物理学、化学和生理学等许多领域的知识。根据物理或化学特性建立起来的分离、纯化方法的主要原理不外乎2个方面：①利用混合物中几个组分分配率的差别将它们分配到可用机械方法分离的2个或几个物相中，如盐析、有机溶剂抽提、层析和结晶等；②把混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于不同的区域而达到分离的目的，如电泳、超速离心和超滤等。由于组织细胞内存在着许多分子结构和理化性质不同的抗原物质，其分离方法也不一样，就是同一类大分子物质，因选材不同，所使用的方法也有很大差别。因此很难有一个通用的标准方法供提取所有生物活性物质使用，所以在提取前必须针对所欲提取的物质，充分查阅文献资料，选用合适的方法。如果要提取一个结构及性质未知的抗原物质，更需要经过各种方法的比较探索，才能找到一些工作规律和获得预期的效果。
下面仅以点带面地介绍一些常用抗原的制备过程。

前言/序言

《动物免疫学实验教程》 一、引言 动物免疫学是研究动物机体如何识别、防御和清除异物（如病原微生物、肿瘤细胞等）的学科。它不仅是理解动物健康与疾病发生发展的重要基础，更是研发新型疫苗、诊断试剂、治疗药物以及制定有效防疫策略的关键。随着分子生物学、细胞生物学、基因工程等技术的飞速发展，动物免疫学研究的深度和广度不断拓展，对实验操作的精准性和技术要求也日益提高。《动物免疫学实验教程》旨在为广大动物医学、动物科学、生物技术等相关专业的学生、研究人员和技术人员提供一套系统、实用、具有指导意义的实验指南，帮助读者掌握动物免疫学核心实验技术，理解实验原理，培养科学思维和严谨的实验作风。 本教程的编写遵循了理论与实践相结合的原则，力求将抽象的免疫学概念通过具体的实验操作得以体现。我们关注实验的通用性、可操作性以及在实际科研和生产中的应用价值，同时也兼顾了不同研究方向和实验条件的灵活性。通过本教程的学习，读者不仅能掌握一系列经典和现代的免疫学实验技术，更能学会如何设计、实施、分析和解释实验结果，为深入开展动物免疫学研究打下坚实的基础。 二、核心内容概述 《动物免疫学实验教程》涵盖了动物免疫学研究中最为关键和常用的实验技术，内容翔实，层次分明。全书共分为若干章节，每个章节都围绕一个或一组密切相关的实验技术展开。 第一部分：动物免疫学基础实验技术 本部分着重于介绍动物免疫学研究中最基本、最常用的实验平台和技术，为后续更复杂的实验奠定基础。 1. 动物免疫学实验材料准备与动物模型选择： 动物材料的获取、饲养与管理：详细介绍不同实验动物（如小鼠、大鼠、家兔、家禽、猪、牛等）的品种选择、采购渠道、饲养环境控制（温度、湿度、光照、通风）、日常管理（喂食、饮水、垫料更换、环境消毒）以及动物福利要求。强调无菌动物、SPF级动物的饲养管理要求，以及不同免疫状态动物的获取与维持。 动物模型的建立与维护：介绍如何根据实验目的，建立各种动物模型，例如免疫缺陷模型（通过外科手术、药物或遗传方法）、自身免疫疾病模型（诱导或自发）、过敏模型、感染模型（细菌、病毒、寄生虫）、肿瘤模型等。阐述模型评估和监测的关键指标，以及模型动物的伦理审批和管理规范。 细胞培养技术的准备：详细讲解细胞培养基的配制（常用培养基成分、无菌操作、储存）、细胞株的复苏、传代、冻存及质量控制。介绍不同类型细胞（如淋巴细胞、巨噬细胞、肿瘤细胞、原代细胞）的培养要求和注意事项。 血清、血浆及组织标本的采集与处理：系统介绍不同动物血液标本的采集方法（如心脏穿刺、颈静脉采血、耳缘静脉采血等）、抗凝剂的选择及使用、血清与血浆的分离与保存。讲解组织器官的采集、固定（石蜡包埋、冰冻切片）、包埋、切片和储存方法，以及淋巴器官（脾脏、淋巴结、胸腺、骨髓）的解剖与分离。 2. 免疫细胞的分离与鉴定： 淋巴细胞的分离：详细介绍从外周血、脾脏、淋巴结、胸腺、骨髓等组织中分离淋巴细胞的多种方法，包括密度梯度离心法（如Ficoll-Paque、Percoll）、磁珠分选法（MACS）等。阐述不同分离方法的原理、操作步骤、关键技术要点及常见问题。 单细胞悬液的制备：讲解如何制备高质量的单细胞悬液，包括组织机械研磨法、酶消化法（如胶原酶、胰蛋白酶），以及去网格化、去除红细胞的步骤。 免疫细胞的鉴定：介绍免疫细胞表型分析的常用技术，如流式细胞术（Flow Cytometry）。详细讲解流式细胞仪的基本原理、仪器操作、荧光标记抗体的选择、抗体染色方法（直接染色、间接染色）、补偿设置、数据采集与分析。列举用于鉴定T细胞（CD3, CD4, CD8）、B细胞（CD19, IgM）、NK细胞（NKp46）、单核/巨噬细胞（CD11b, F4/80）、树突状细胞（CD11c, MHC II）等关键表面标记物的组合。 3. 抗体相关实验技术： 抗体的制备与纯化：介绍多克隆抗体和单克隆抗体的制备原理，包括动物免疫、脾细胞瘤形成、杂交瘤筛选、抗体生产与鉴定。讲解腹水法、细胞培养法生产抗体，以及DEAE-Sepharose、Protein A/G亲和层析等抗体纯化技术。 ELISA（酶联免疫吸附测定）：详细介绍ELISA的基本原理，包括直接ELISA、间接ELISA、双抗体夹心ELISA、竞争性ELISA等各种方法的实验设计、试剂准备、操作步骤、结果判读与定量分析。强调定量检测血清中特定抗体滴度、细胞因子、激素等物质的准确性。 Western Blotting（蛋白质印迹法）：阐述Western Blotting检测特异性蛋白质的原理。详细介绍样品制备（裂解、变性）、SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白、转膜（半干法、湿转法）、封闭、一抗二抗孵育、显色检测（化学发光、显色反应）等关键步骤。介绍信号检测与定量分析。 免疫荧光技术（Immunofluorescence）：讲解免疫荧光技术用于检测细胞或组织中特定抗原的定位和表达。介绍直接免疫荧光和间接免疫荧光法，包括抗体选择、染色过程（固定、透化、封闭、一抗二抗孵育、复染）、荧光显微镜观察与图像采集。 免疫组化技术（Immunohistochemistry）：介绍免疫组化技术用于检测组织切片中抗原表达。详细讲解组织固定、石蜡包埋、切片、抗原修复、染色流程（封闭、一抗二抗孵育、DAB显色）、复染和封片。强调结果的特异性和组织学背景。 第二部分：动物免疫应答评估与研究 本部分将实验技术应用于评估动物的免疫功能和研究免疫应答的机制。 4. 细胞免疫功能检测： 淋巴细胞增殖试验：介绍使用3H-TdR掺入法、MTT法、CCK-8法等检测淋巴细胞在体外受到特异性抗原或非特异性刺激（如PHA、ConA、LPS）后的增殖能力。阐述实验设计、操作流程、数据采集与分析，以及增殖指数的计算。 细胞因子检测：介绍检测细胞因子（如IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-4, IL-10等）的多种方法，包括ELISA、流式细胞术（胞内染色）、ELISPOT（酶联免疫斑点法）。重点讲解ELISPOT在检测单个分泌细胞功能方面的优势。 细胞毒性试验：介绍NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞（CTL）介导的细胞杀伤功能的检测方法。包括51Cr释放法、LDH释放法、台盼蓝染色法等。详细讲解实验原理、操作步骤、靶细胞与效应细胞的比例、孵育时间以及杀伤率的计算。 5. 体液免疫功能检测： 血清抗体滴度测定：通过间接ELISA或血凝试验（HA）等方法，测定动物血清中针对特定抗原（如疫苗抗原、病原体抗原）产生的抗体水平。详细介绍阳性对照、阴性对照的选择以及结果的判读。 巨噬细胞吞噬功能测定：介绍利用吞噬颗粒（如氧化后的红细胞、细菌、荧光微球）检测巨噬细胞吞噬能力的实验方法。讲解吞噬指数（PI）和吞噬细胞百分比（PP）的计算。 6. 动物疫苗免疫效果评价： 免疫原性评价：通过测定动物接种疫苗后的特异性抗体滴度、细胞免疫反应（如淋巴细胞增殖、细胞因子分泌）以及保护性免疫力的指标，来评估疫苗的免疫原性。 保护性试验：在动物模型上，将免疫动物与未免疫动物暴露于具有致病性的病原体，观察并比较两组动物的发病率、死亡率、临床症状和病理变化，以评估疫苗的保护效果。 第三部分：动物免疫学前沿实验技术 本部分介绍一些更高级、更前沿的动物免疫学研究技术，为深入探索免疫机制提供工具。 7. 基因工程技术在动物免疫学中的应用： 基因枪转化与病毒载体介导的基因转染：介绍如何将外源基因导入动物细胞或动物体内，以研究基因功能或开发基因治疗。 RNA干扰（RNAi）与CRISPR/Cas9基因编辑技术：阐述如何利用RNAi技术敲低特定基因的表达，或通过CRISPR/Cas9技术敲除、敲入或编辑基因，以研究免疫相关基因的功能。 8. 免疫学检测新技术： 流式细胞术的多色分析与分选：介绍如何利用多色流式细胞术同时检测细胞上的多种表面和胞内标志物，实现对复杂免疫细胞群的精细分析。讲解流式细胞仪的细胞分选功能，用于获取特定细胞亚群进行后续研究。 质谱流式细胞术（Mass Cytometry）：介绍质谱流式细胞术利用金属同位素标记抗体，实现数十甚至上百种抗原的同时检测，提供更全面的细胞表型信息。 单细胞测序技术（Single-cell sequencing）：介绍单细胞RNA测序（scRNA-seq）和单细胞ATAC测序（scATAC-seq）等技术，用于解析免疫细胞群体的异质性，揭示免疫细胞的发育、分化和功能调控机制。 三、特色与亮点 体系完整，内容全面：从基础的材料准备到前沿的基因编辑技术，涵盖了动物免疫学实验的各个方面。 原理清晰，操作规范：每种实验技术都详细阐述了其基本原理、实验步骤、关键注意事项以及结果判读方法。 图文并茂，直观易懂：配有大量的示意图、流程图和真实实验照片，帮助读者更好地理解实验过程。 实例丰富，应用广泛：结合实际的科研和生产需求，提供了多种动物模型和实验设计的参考，具有很强的指导意义。 注重细节，防范风险：强调了实验安全、动物福利以及生物安全等方面的要求。 理论与实践相结合：将免疫学理论知识与具体的实验操作紧密结合，加深读者的理解。 兼顾经典与前沿：既包含了免疫学研究中的经典实验技术，也引入了近年来发展迅速的新技术，保持了内容的先进性。 四、读者对象 本书适用于高等院校动物医学、动物科学、生物技术、免疫学、兽医学等相关专业的本科生、研究生，以及从事动物免疫学研究的科研人员、实验室技术人员和畜牧兽医工作者。 五、结语 《动物免疫学实验教程》是献给每一位渴望深入理解动物免疫世界、掌握严谨科学实验方法的探索者的礼物。我们相信，通过本书的引导，读者能够自信地踏上动物免疫学实验的征程，在实验室中发现真理，为动物健康、畜牧业发展乃至人类健康贡献力量。掌握这些实验技能，不仅是完成学业的要求，更是未来在科研领域、产业界施展才华的关键。

评分☆☆☆☆☆

这本书的排版和装帧设计真的让人眼前一亮，虽然我拿到的是电子版，但那种细节的处理，比如章节的过渡、图表的布局，都体现了编者对学习者体验的重视。内页的纸张质感（如果是实体书的话，我猜会很棒），光线下的反光度控制得非常好，长时间阅读也不会觉得眼睛疲劳。更值得称赞的是，作者在理论与实际操作之间的平衡把握得极其到位。它不是那种枯燥地堆砌公式和概念的教科书，而是像一位经验丰富的老教授，耐心地引导你一步步走进复杂的实验世界。例如，在描述细胞培养环境的控制时，书中不仅给出了精确的温湿度参数，还配上了详尽的注意事项和常见问题的解决方案，这种贴近实际操作的叙述方式，对于初学者来说简直是救命稻草。我特别欣赏它在图示上的用心，那些流程图、结构图都清晰到可以作为独立的教学挂图使用，连最基础的试剂准备步骤，都用精炼的语言和直观的图形进行了分解，让人感觉每一步都有迹可循，极大地增强了实验的信心。

评分☆☆☆☆☆

从装帧和内容深度来看，这本书显然是为严肃的科研人员和高年级学生量身打造的，它的价值远超一个普通“教程”的范畴。我注意到书中引用的文献资料都非常新颖且具有权威性，这保证了教程中的方法论是基于最新的科学共识。即便是一些看似简单的实验，例如ELISA的包被步骤，书中也详细讨论了包被缓冲液的pH值对不同类型抗原吸附效率的影响机制，这显示出编者不仅关注“如何做”，更关注背后的“为什么会这样”。整本书传递出一种严谨、求实的学术态度，没有浮夸的宣传，只有实实在在、经过反复验证的知识和技术。对于任何想要在免疫学领域进行深入、原创性研究的人来说，这本书更像是一部工具书和方法论手册的结合体，值得反复翻阅和收藏。

评分☆☆☆☆☆

作为一本实验教程，我最看重的是它的“可操作性”和“容错率”，而这本书在这两方面做得可以说是教科书级别的典范。在描述具体操作步骤时，语言极其精炼，没有一句废话，每一个动词的选择都精确指向了实验室的实际动作。更重要的是，它非常诚实地列出了那些“很容易失败”的实验点。例如，在进行流式细胞术的样本制备时，它用醒目的加粗字体提示了“洗涤时的离心速度对细胞回收率的影响”，并且提供了不同代数细胞系在这一步骤中的细微差别调整建议。这种对细节的关注，体现了作者对实验过程中可能遇到的各种“坑”了如指掌。我感觉这本书在某种程度上扮演了“虚拟实验导师”的角色，在读者真正开始动手之前，就已经预料到并解决了大多数可能出现的混乱和失误，使得实验过程更加流畅和高效。

评分☆☆☆☆☆

这本书的章节组织逻辑简直是艺术品，它遵循了从宏观到微观、从基础到高级的完美过渡。它不是简单地罗列实验项目，而是构建了一个清晰的知识体系框架。比如，在介绍免疫细胞分离技术时，它不是孤立地介绍每种技术，而是先用一个总览图展示了不同分离方法的适用场景和优缺点，然后才逐一深入到具体的步骤。这种系统性的编排，使得读者在学习一项新技术时，能够立刻将其置于整个免疫学研究的大背景下进行思考，而不是零散地记忆操作流程。这种结构化的学习体验，让知识的积累变得立体而非扁平化。我个人尤其喜欢它在每个单元结束后设置的“设计思考”栏目，它引导读者思考“为什么我们要这么做，而不是换一种方法？”，这种对实验设计的哲学层面的探讨，极大地提升了读者的科研素养。

评分☆☆☆☆☆

这本书的理论深度和广度完全超出了我的预期，它不仅仅停留在基础的免疫学原理介绍，而是巧妙地将分子生物学的最新进展融入到实验设计的思路之中。比如，在讨论抗体纯化那一章时，作者并未止步于传统的亲和层析，而是深入探讨了利用重组技术优化抗体片段（如Fab或scFv）的策略，并且对不同纯化介质的选择标准进行了深入的对比分析，这种前沿性和实用性的结合，使得这本书的价值远超一般的实验指南。我发现它在解释一些关键机制时，总能提供一个非常巧妙的类比或一个历史背景的引入，这让原本抽象难懂的免疫应答通路变得鲜活起来。读起来感觉不像在看一本冷冰冰的教材，更像是在听一场高水平的学术讲座，只是这个讲座的互动性更强，因为它要求读者亲自动手实践。即便是对于我这种已经接触过一些基础实验的人来说，其中关于数据统计和结果判读的章节也提供了全新的视角和更严谨的方法论。

评分☆☆☆☆☆

本书比较基础，建议实验人员还是买那本经编免疫学实验指南~

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