共聚焦顯微鏡技術（導讀版）（英文版） [Techniques in Confocal Microscopy] pdf epub mobi txt 電子書 下載 2025

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[美] 康恩（P.Michael Conn） 著

圖書標籤:

• 共聚焦顯微鏡
• 顯微技術
• 生物成像
• 光學顯微鏡
• 細胞生物學
• 生物醫學工程
• 熒光顯微鏡
• 圖像處理
• 科研工具
• 英文教材

齣版社： 科學齣版社

ISBN：9787030330550

版次：1

商品編碼：10921205

包裝：精裝

外文名稱：Techniques in Confocal Microscopy

開本：16開

齣版時間：2012-01-01

用紙：膠版紙

頁數：511

字數：812000

正文語種：英文

編輯推薦

　　 《共聚焦顯微鏡技術（導讀版）（英文版）》特點精選自叢書《酶學方法》（Methods'in Enzymology）的不同分捲（302，307，356捲）在闡述具體方法時強調瞭其在常規情況下的適用性及潛在的局限性。

內容簡介

　　 《共聚焦顯微鏡技術（導讀版）（英文版）》的目錄和前言已經譯成中文，正文部分保留英文原版。另附北京大學醫學部高級工程師何其華博士、第二軍醫大學電鏡中心楊勇驥教授所作精彩導讀。伴隨著愈加重要的價值和愈發濃厚的研究興趣，共聚焦顯微鏡技術和其他重要的顯微技術正在快速發展。共聚焦顯微鏡技術具有高分辨率特彆是縱嚮高分辨率，以及數字圖像三維層析的特點，被廣泛應用於生物醫學、材料科學、微電子製造、精密測量等領域的檢測與分析。
　　 作為《實驗室解決方案》（Reliab/e /ab So/utions）係列叢書的分冊，《共聚焦顯微鏡技術（導讀版）（英文版）》收錄瞭共聚焦顯微鏡橫跨生命科學領域不同學科的廣泛應用，展望瞭其迅速發展的前景。作者介紹瞭在原始刊物中未曾發錶過的使用捷徑和技巧，並將共聚焦顯微鏡技術與其他相關方法進行比較，從而幫助讀者改進現有的操作步驟以應用於新的研究。《共聚焦顯微鏡技術（導讀版）（英文版）》適閤共聚焦顯微鏡領域的研究人員使用，亦可供生命科學各專業的學生、教師、研究人員參考。

目錄

編者
前言
第一部分 使用注意事項和設備原理
1．共聚焦顯微鏡的理論基礎
Robert H．Webb
I．簡介
TI．光學切片
III.點擴散函數
IV.針孔
V．放大倍數
VI．顯微鏡的完整結構
VII.共聚焦顯微鏡的種類
VIII.多光子顯微鏡
IX.光源
X．非相乾光源
Ⅺ，光漂白
XII.閤軸
XIII.數值孔徑
XIV．小結
參考文獻
2．共聚焦顯微鏡獲取生物信號時的注意事項
Hao He, Rose Chik Ying Ong, Kam Tai Chan, Ho Pui Ho, and Siu Kai Kong
I．簡介
II．激光誘導熒光信號的增強
III．DMSO的含水量和染料負載的效率
參考文獻
3．大容量存儲器和數據處理
Guy Cox
I．大容量存儲器
II．圖像處理
附錄
參考文獻
4．共聚焦熒光顯微鏡的熒光抗淬滅劑
Miguel Berrios, Kimberly A. Conlon, and David E. Colflesh
I．修訂
II．簡介
III．樣品製備
IV．抗熒光淬滅劑
V．熒光衰減圖像的采集
附錄：供應商
參考文獻
5．共聚焦顯微鏡的封片技術
Manabu Kagayama and Yasuyuki Sasano
I．簡介
II．材料與方法
III.結果與討論
參考文獻
6．共聚焦顯微鏡樣品的全組織包埋與厚片製備
Hisashi Hashimoto, Hiroshi Ishikawa, and Moriaki Kusakabe
I．修訂
II．簡介
III.固定
IV.切片
V．預處理
VI.熒光染色
VII.標記熒光明膠的血管模型
VIII．封片
IX.觀察
附錄
參考文獻
7．利用共聚焦顯微鏡研究細胞結構和功能
Ghassan Bkaily and Danielle Jacques
I．簡介
II．樣品製備
III.共聚焦顯微鏡的參數設置
……
第二部分 功能方法
第三部分 綠色熒光蛋白
第四部分 激光捕獲微切割技術

前言/序言

深入探索電鏡世界的基石：超高分辨率成像與樣品製備的理論與實踐 本導讀手冊旨在為光學顯微鏡領域的研究者、技術人員和高級學生提供一個全麵、深入的視角，聚焦於超越傳統衍射極限的成像技術，以及為實現這些高精度觀察而必需的復雜樣品處理流程。本書將重點探討冷凍電子顯微鏡（Cryo-EM）和電子斷層掃描（ET）這兩大前沿領域的核心原理、儀器配置、數據采集策略，以及最終的三維（3D）結構解析流程。 第一部分：超越衍射極限的成像革命——冷凍電鏡基礎與單顆粒分析（SPA） 本部分將係統闡述電子顯微鏡（EM）作為結構生物學核心工具的理論基礎，並著重講解如何利用冷凍技術剋服生物樣品在真空環境下失水的難題，從而實現接近生理狀態下的高分辨率觀察。 1.1 電子光學與成像原理的深化 我們將從電子束的産生、聚焦與加速機製入手，詳細解析電子槍（如熱發射槍和場發射槍）的特性差異及其對成像質量的影響。核心內容將聚焦於像差校正技術。傳統球差對高分辨率成像的限製將被深入剖析，隨後詳盡介紹球差校正器（Spherical Aberration Corrector）的設計原理（如Wien濾波器和六極透鏡係統），以及如何通過精確計算和實時反饋係統，將分辨率提升至亞埃級水平。此外，對相位闆（Phase Plate）在低對比度樣品（如非晶態生物大分子）成像中的作用及其不同類型（如Zernike型和Fresnel型）的優缺點進行對比分析。 1.2 冷凍技術與樣品準備的精密度 生物樣品穩定性的維持是高分辨率冷凍電鏡成像成功的關鍵。本章將詳細拆解玻璃態冷凍（Vitrification）的物理化學基礎，解釋如何通過精確控製冷凍速度、鋪展液的濃度和厚度，避免冰晶的形成。我們將介紹高壓冷凍（HPM）技術在固定大體積樣品中的應用，以及噴射冷凍（Jet Freezing）在處理細胞團塊和微小組織時的適用性。對於二維（2D）晶體和縴維樣品的製備，我們將討論單層碳膜的製備、支撐膜的選擇（如石墨烯、氮化矽網格）以及水滴厚度的精確控製。樣品室的濕度控製和汙染預防措施，特彆是對水蒸氣和碳沉積的監測，也將被詳細討論。 1.3 單顆粒分析（SPA）：從圖像到原子模型 SPA是解析結構生物學分子構象的關鍵路徑。本節將分解整個數據處理流程： 圖像采集策略： 涉及電鏡的自動化數據采集軟件（如SerialEM或Leginon）的使用，低劑量成像下的信噪比優化，以及運動補償技術（如幀積分和束流對齊）的必要性。我們將討論如何通過圖像移位（Image Shift）技術高效采集多個區域的圖像，提高數據采集效率。 圖像預處理與增強： 介紹如何進行運動校正、對比度增強（如CTF估計和校正），以及對低信噪比圖像進行預篩選的算法。 三維重建： 核心內容在於2D分類和3D優化。我們將深入探討如何利用迭代重投影和優化算法（如梯度下降法）來確定不同顆粒的最佳投影方嚮（Euler角）。對比分析基於隨機模型初始化的方法（如隨機重疊法）和基於單粒子重建算法（如IMAGIC或RELION）的優劣。 分辨率評估與模型驗證： 重點講解黃金標準（Fourier Shell Correlation, FSC）麯綫的解讀，以及如何使用FSC麯綫確定最終模型的有效分辨率。此外，還將介紹如何將重建的密度圖與已知化學結構進行擬閤，並評估模型的幾何閤理性。 第二部分：揭示細胞結構——電子斷層掃描（ET）與體數據采集 本部分將轉嚮如何對復雜的、多蛋白復閤物或完整細胞進行三維層析成像，這是電子斷層掃描（ET）的核心能力。 2.1 斷層成像的理論基礎與采集模式 ET通過采集樣品在不同傾角下的投影圖像來重建三維結構。本節將詳細闡述傾斜序列（Tilt Series）的采集原理。我們將分析傾斜誤差（如機械不穩定性、樣品漂移）對重建質量的負麵影響，並介紹先進的球差校正傾斜采集策略，以最小化在極端傾角下的像差增加。本章還將對比介紹雙傾角采集（Dual-tilt Acquisition）和螺鏇掃描（Helical Scanning）在提高數據完整性和減少層析重建僞影方麵的優勢。 2.2 亞層析成像（Subtomogram Averaging, STA） STA技術允許研究人員對斷層數據中重復齣現的結構單元（如膜蛋白復閤體、細胞骨架絲）進行平均，從而在復雜的細胞環境中獲得高分辨率結構信息。我們將探討： 目標識彆與配準： 如何在原始三維體數據中自動或半自動地識彆感興趣的目標粒子。 粒子提取與定嚮： 描述如何根據預先設定的模闆或通過濛版定位來精確提取粒子，並確定其初始空間取嚮。 迭代平均與細化： 介紹如何利用迭代的3D配準和平均算法來提高STA結果的分辨率，並討論如何處理由於結構柔性導緻的信號損失問題。 2.3 整體生物學分析（Cryo-ET for Cellular Context） 本部分關注如何將冷凍ET應用於復雜的細胞和組織結構分析。我們將討論大視野成像（Wide-field Imaging）的技術，以及如何結閤聚焦離子束（FIB）技術進行斷層成像的精確定位（FIB-milling/Lamella preparation），從而製備齣適閤電子束穿透的薄層（Lamella）。 數據處理挑戰： 重點分析體數據固有的低信噪比問題、層析重建中的“缺失錐形（Missing Wedge）”效應，以及如何通過先進的濾波和反捲積技術來部分緩解這些限製。 應用實例： 通過具體的案例研究，展示冷凍ET在解析膜蛋白動態組裝、綫粒體動態變化、以及病毒入侵機製等前沿生物學問題中的強大潛力。 本書旨在提供一個技術驅動的指南，使讀者能夠掌握從樣品製備到最終三維模型解析的每一個關鍵環節，為推動超高分辨率冷凍電鏡領域的研究奠定堅實的理論和實踐基礎。

評分☆☆☆☆☆

這本書的“導讀版”定位非常精準，它並非那種枯燥的理論堆砌，而是充滿瞭“操作感”。我不是一個理論型的讀者，我更喜歡動手實踐。這本書在這一點上做得非常齣色，它不僅解釋瞭“是什麼”，更重要的是解釋瞭“怎麼做”。從儀器的初步設置，到樣品準備的注意事項，再到不同探測器和濾光片的組閤運用，它都提供瞭非常具體的操作指導。我特彆喜歡它在描述一些精細操作時，使用瞭大量準確的術語，並且每次都會附帶簡短的解釋，讓我能夠理解這些術語背後的含義。書中甚至還包含瞭一些“故障排除”的小貼士，這對於初學者來說簡直是福音！我之前因為一些基本操作不當，浪費瞭很多寶貴的時間，讀瞭這本書之後，我纔意識到很多問題都可以通過一些簡單的調整來避免。它讓我對共聚焦顯微鏡的使用充滿瞭信心，感覺自己真的可以駕馭這個強大的工具瞭。

評分☆☆☆☆☆

從一個完全的門外漢的角度來看，這本書就像一本為我量身定做的“秘籍”。我之前對顯微鏡的瞭解僅限於大學本科的普通光學顯微鏡，共聚焦聽起來就像是高科技的代名詞，充滿瞭神秘感。這本書的語言風格非常友好，沒有使用太多令人望而生畏的專業術語，即使偶爾齣現，也會用非常直觀的比喻來解釋，讓我能夠輕鬆地理解。我最喜歡它在開篇就用生動有趣的方式解釋瞭“為什麼需要共聚焦”，以及它能解決什麼普通顯微鏡無法解決的問題。這立刻激發瞭我深入學習的興趣。書中關於樣品製備的部分，也給瞭我很大的啓發，我之前總覺得樣品處理非常復雜，但這本書用簡潔明瞭的方式，講解瞭幾個關鍵的步驟，讓我覺得沒那麼難以接受。這本書讓我覺得，共聚焦顯微鏡並非遙不可及，而是我通過努力可以掌握的技能。

評分☆☆☆☆☆

這本書簡直是我的顯微鏡之旅中的一座燈塔！一直以來，我對共聚焦顯微鏡充滿好奇，但總覺得它高深莫測。這本書的“導讀版”標簽讓我眼前一亮，抱著試一試的心態入手，結果完全超齣瞭我的預期。從基礎的光學原理到復雜的成像策略，它都用一種極其易懂且引人入勝的方式娓娓道來。我特彆喜歡它在解釋那些抽象概念時，總是能巧妙地結閤實際應用場景，讓我瞬間明白“原來如此”。書中大量的圖例更是功不可沒，清晰地展示瞭各種成像模式的特點，甚至連我一直搞不清楚的“共振掃描”和“點掃描”之間的細微差彆，也能通過圖解和文字的對照，迅速瞭然。我之前嘗試過一些在綫教程，但總感覺零散且難以係統掌握，而這本書則提供瞭一個完整的知識框架，讓我能夠逐步構建起對共聚焦顯微鏡的認知體係。讀完這本書，我感覺自己不再是那個望“鏡”興嘆的門外漢，而是能夠自信地探索共聚焦世界的初學者。它為我打開瞭一扇新的大門，讓我對生命科學的研究充滿瞭更深的期待。

評分☆☆☆☆☆

我必須說，這本書的作者在內容的組織和呈現上，簡直是藝術品！我是一名研究生，正在我的研究項目中需要使用共聚焦顯微鏡，但之前對此的瞭解僅限於皮毛。這本書就像一本精心設計的教科書，每一章都循序漸進，從最基礎的部件介紹，到各種高級功能的運用，都有條不紊地展開。我最欣賞的是它在討論不同成像技術的優缺點時，並沒有簡單地羅列，而是深入分析瞭它們各自的適用場景以及可能遇到的挑戰，並且提供瞭解決思路。例如，在討論圖像采集參數的選擇時，它給齣瞭非常實用的建議，讓我能夠根據自己的樣本特點，最大化地獲得高質量的數據。此外，書中穿插的一些案例分析，更是讓我看到瞭共聚焦顯微鏡在解決實際科學問題中的強大力量，這對我來說是巨大的鼓舞。它不僅是技術指南，更像是同行給我的經驗分享，讓我少走瞭很多彎路。這本書的英文錶述也非常地道和專業，對於我提升英文科研閱讀能力也有很大的幫助。

評分☆☆☆☆☆

這本書為我打開瞭共聚焦顯微鏡研究的新視野。作為一名在相關領域工作多年的研究人員，我對共聚焦顯微鏡的應用場景並不陌生，但深入瞭解其背後的技術原理和最新的發展趨勢，我一直覺得有所欠缺。這本書的內容深度恰到好處，它在介紹基礎知識的同時，也觸及瞭一些前沿的技術進展。我尤其對其中關於三維重建和定量分析的章節印象深刻，這些內容直接與我的研究課題相關。書中對不同重建算法的優劣勢分析，以及如何進行可靠的數據分析，都給我提供瞭非常有價值的參考。此外，作者在討論新的成像技術時，並沒有迴避其局限性，而是客觀地分析瞭它們在實際應用中可能遇到的挑戰，這使得這本書的內容更具現實意義。它不僅僅是一本“如何使用”的指南，更是一本“如何更好地使用”和“如何思考如何發展”的啓迪之書。

評分☆☆☆☆☆

精裝版，比較適閤專業人員參考

評分☆☆☆☆☆

共聚焦顯微鏡的經典寶書，作為工具書用

評分☆☆☆☆☆

很好用，傢裏人很喜歡。。很好用，傢裏人很喜歡。。很好用，傢裏人很喜歡。。很好用，傢裏人很喜歡。。

評分☆☆☆☆☆

共聚焦顯微鏡的經典寶書，作為工具書用

評分☆☆☆☆☆

精裝版，比較適閤專業人員參考

評分☆☆☆☆☆

很好。

評分☆☆☆☆☆

挺好！值得好好學習！！！！

評分☆☆☆☆☆

很好

評分☆☆☆☆☆

共聚焦顯微鏡的經典寶書，作為工具書用