動物細胞培養——基本技術和特殊應用指南（原書第六版） pdf epub mobi txt 電子書 下載 2025

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[英] R.I.Freshney 著，章靜波，徐存拴 等 譯

圖書標籤:

• 動物細胞培養
• 細胞生物學
• 生物技術
• 實驗技術
• 實驗室指南
• 生物醫學
• 細胞工程
• 原代培養
• 細胞係
• 無菌技術

齣版社： 科學齣版社

ISBN：9787030397188

版次：1

商品編碼：11439659

包裝：精裝

叢書名： 生命科學實驗指南係列

開本：16開

齣版時間：2014-04-01

用紙：膠版紙

頁數：920

正文語種：中文

編輯推薦

適讀人群 ：本書可供有關學科大學師生尤其是研究生、科研人員、生物工程與生物製藥，以及臨床醫生學習參考。

本書是迄今有關動物細胞培養技術、設備、原理與實踐的*全麵的資料源泉，是細胞培養基本方法領域的領銜之作。

內容簡介

《動物細胞培養——基本技術和特殊應用指南》曆來被看作該領域的經典與領銜工作。本版除保留前五版的基本內容（如原代培養、細胞係、傳代、分化、細胞特化、汙染、無菌技術、細胞毒性、冷凍保存、實驗室布局與設備培訓綱要等）之外，為反映組織工程與再生醫學發展的需要，特地增加瞭“乾細胞”一章，以及某些新的特殊技術。內容新穎，程序可靠。極具參考與模仿價值。

作者簡介

弗雷謝尼博士是格拉斯哥英國Eeatson癌癥研究實驗室腫瘤學與應用藥理學中心的榮譽資深研究員。迄今已齣版多部專著。是細胞培養技術領域的世界*名專傢。

目錄

譯者的話
前言與緻謝
縮略語
圖片目錄
彩版目錄
方案目錄
第1章 緒論 1
1.1 曆史背景 1
1.2 組織培養的優點 7
1.2.1 環境控製 7
1.2.2 樣品的特徵和均一性 8
1.2.3 經濟、規模和機械化 8
1.2.4 體內環境的體外模擬 8
1.3 局限性 9
1.3.1 專業技能 9
1.3.2 量的問題 9
1.3.3 去分化和選擇 10
1.3.4 細胞的起源 10
1.3.5 不穩定性 10
1.4 體外的主要差異 10
1.5 組織培養的類型 11
第2章 培養細胞的生物學 14
2.1 培養細胞的環境 14
2.2 細胞黏附 14
2.2.1 細胞黏附分子 15
2.2.2 細胞間連接 16
2.2.3 細胞外基質 16
2.2.4 細胞骨架 18
2.2.5 細胞遷移 18
2.3 細胞增殖 18
2.3.1 細胞周期 18
2.3.2 細胞增殖的調控 19
2.4 細胞分化 20
2.4.1 細胞分化的維持 21
2.4.2 細胞去分化 21
2.5 細胞信號傳遞 24
2.6 能量代謝 25
2.7 培養細胞的起源 26
2.7.1 培養的開始 26
2.7.2 細胞係的演化 27
2.7.3 細胞的衰老 28
2.7.4 連續細胞係的轉化與形成 28
第3章 實驗室設計、布局及設備 30
3.1 布局、規劃和服務設施 30
3.1.1 要求 32
3.1.2 服務設施 34
3.1.3 通風裝置 35
3.2 布局 35
3.2.1 無菌操作區 36
3.2.2 層流原理 36
3.2.3 工作颱 36
3.2.4 檢疫室和防範室 36
3.2.5 培養 37
3.2.6 準備區 40
3.2.7 儲存 41
第4章 設備及材料 44
4.1 組織培養實驗室的要求 44
4.2 無菌區 46
4.2.1 潔淨颱 46
4.2.2 手推車 48
4.2.3 無菌液操作——移液和分裝 49
4.2.4 倒置顯微鏡 53
4.2.5 CCD攝像機和監視器 54
4.2.6 解剖顯微鏡 54
4.2.7 離心機 54
4.2.8 細胞計數 55
4.3 細胞孵育和培養 55
4.3.1 恒溫箱 55
4.3.2 濕式CO2培養箱 56
4.3.3 溫度記錄儀 57
4.3.4 滾動架 57
4.3.5 磁力攪拌器 58
4.3.6 培養器皿 58
4.4 實驗準備和殺菌 58
4.4.1 清洗 58
4.4.2 培養基和試劑的製備 59
4.4.3 殺菌 61
4.5 儲存 63
4.5.1 消耗品 63
4.5.2 冰箱和冷凍箱 63
4.5.3 冷藏器 64
4.5.4 可控速率冷凍箱 64
4.6 附屬設備 64
4.6.1 計算機和網絡 64
4.6.2 普通正置顯微鏡 65
4.6.3 低溫冷凍箱 65
4.6.4 共聚焦顯微鏡 65
4.6.5 PCR循環儀 65
4.7 專用設備 66
4.7.1 顯微注射裝置 66
4.7.2 集落計數器 66
4.7.3 可離心淘洗機 66
4.7.4 流式細胞儀 66
第5章 無菌技術 67
5.1 無菌技術的目標 67
5.1.1 微生物汙染的風險 67
5.1.2 無菌的維持 67
5.2 創造無菌環境的各種因素 68
5.2.1 層流 69
5.2.2 安靜的工作區域 71
5.2.3 工作麵 71
5.2.4 個人衛生 73
5.2.5 試劑和培養基 73
5.2.6 培養物 73
5.3 滅菌操作 73
5.3.1 擦拭 73
5.3.2 加蓋 74
5.3.3 灼燒 74
5.3.4 試劑瓶和培養瓶的操作 74
5.3.5 移液 75
5.3.6 液體傾倒 75
5.4 標準操作程序 76
5.5 儀器和設備 82
5.5.1 培養箱 82
5.5.2 盒裝培養物 82
5.5.3 充入CO2氣體 82
第6章 安全性、生物倫理及驗證 83
6.1 實驗室安全 83
6.2 危險性評估 83
6.3 標準操作程序 85
6.4 安全規則 85
6.5 常規安全 86
6.5.1 操作者 87
6.5.2 設備 87
6.5.3 玻璃器皿和銳利物品 87
6.5.4 化學毒性 88
6.5.5 氣體 89
6.5.6 液氮 89
6.5.7 灼燒 90
6.6 火 90
6.7 放射性 91
6.7.1 攝入 91
6.7.2 放射性廢棄物的處理 91
6.7.3 標記的試劑 91
6.7.4 高能源 91
6.8 生物危害性 92
6.8.1 生物防範水平 92
6.8.2 微生物學安全通風櫥（MSC） 94
6.8.3 人體活檢材料 96
6.8.4 遺傳操作 97
6.8.5 生物危害性廢棄物處理 97
6.8.6 熏蒸 97
6.9 生物倫理 98
6.9.1 動物組織 98
6.9.2 人體組織材料 98
6.10 質量保證 99
6.10.1 操作程序 100
6.10.2 質量控製（QC） 100
6.11 驗證 100
6.11.1 鑒定 100
6.11.2 來源 101
6.11.3 汙染 101
第7章 培養器皿和附著物 102
7.1 附著物 102
7.1.1 細胞的附著和生長 102
7.1.2 常見的附著材料 102
7.1.3 其他替代性附著物 103
7.2 錶麵處理 103
7.2.1 基質覆蓋 103
7.2.2 飼養層 105
7.2.3 非黏附性附著麵 106
7.3 培養器皿的選擇 107
7.3.1 細胞産量 107
7.3.2 懸浮培養 109
7.3.3 通風 110
7.3.4 取樣和分析 111
7.3.5 不均勻生長 112
7.3.6 價格 112
7.4 特殊係統 112
7.4.1 滲透性支持物 112
7.4.2 三維基質 113
第8章 成分明確培養基及補充物 115
8.1 培養基的發展史 115
8.2 物理化學特徵 115
8.2.1 pH 115
8.2.2 CO2和碳酸鹽 116
8.2.3 緩衝作用 123
8.2.4 氧氣 123
8.2.5 滲透壓 124
8.2.6 溫度 124
8.2.7 黏滯度 125
8.2.8 錶麵張力和成泡性 125
8.3 平衡鹽溶液 126
8.4 完全培養基 126
8.4.1 氨基酸 127
8.4.2 維生素 127
8.4.3 鹽類 127
8.4.4 葡萄糖 128
8.4.5 有機補充物 128
8.4.6 激素和生長因子 128
8.4.7 抗生素 128
8.5 血清 129
8.5.1 蛋白質 130
8.5.2 生長因子 131
8.5.3 激素 131
8.5.4 營養物及代謝物 132
8.5.5 脂類 132
8.5.6 礦物質 132
8.5.7 抑製物 132
8.6 培養基和血清的選擇 132
8.6.1 批次預約 134
8.6.2 血清的測試 135
8.6.3 熱滅活 135
8.7 其他添加物 136
8.7.1 氨基酸水解物 136
8.7.2 胚胎浸齣液 136
8.7.3 適應性培養基 136
第9章 無血清培養基 137
9.1 血清的缺點 145
9.2 無血清培養基的優點 146
9.2.1 標準培養基的定義 146
9.2.2 選擇性培養基 146
9.2.3 調節細胞增殖與分化 146
9.3 無血清培養基的缺點 146
9.4 血清的替代 147
9.4.1 無血清培養基的商業供應 147
9.4.2 血清替代物 147
9.4.3 無血清傳代培養 148
9.4.4 激素 149
9.4.5 生長因子 149
9.4.6 血清中的營養物質 154
9.4.7 蛋白質和多聚胺 154
9.4.8 黏滯度 154
9.5 無血清培養基的選擇 154
9.5.1 細胞或産物特異性 154
9.5.2 適應無血清培養基 157
9.6 無血清培養基的研發 157
9.7 無血清培養基的製備 157
9.8 無動物蛋白培養基 158
9.9 小結 158
第10章 準備與滅菌 159
10.1 準備試劑與用品 159
10.2 設備與液體的滅菌 159
10.3 設備 162
10.3.1 玻璃器皿 162
10.3.2 玻璃移液管 165
10.3.3 螺口蓋 168
10.3.4 清潔劑的選擇 170
10.3.5 種類繁雜的設備 170
10.3.6 可重復使用的滅菌過濾器 171
10.4 試劑與培養基 173
10.4.1 水 173
10.4.2 純水器的維護 175
10.4.3 平衡鹽溶液 175
10.4.4 培養基的配製與滅菌 177
10.4.5 乾粉培養基 180
10.4.6 特製培養基 182
10.5 培養基的滅菌 183
10.5.1 可高壓滅菌的培養基 183
10.5.2 除菌過濾 183
10.5.3 血清 192
10.5.4 其他試劑的準備與滅菌 195
10.6 培養基的質控、檢測和儲存 196
10.6.1 質量控製 196
10.6.2 無菌檢測 196
10.6.3 培養物檢測 197
10.6.4 儲存 197
第11章 原代培養 199
11.1 原代培養入門 199
11.1.1 用於解離組織的酶 199
11.1.2 解離過程的共同特點 200
11.2 組織分離 200
11.2.1 小鼠胚胎 200
11.2.2 雞胚 204
11.2.3 人體活檢材料 206
11.3 原代培養的類型 207
11.3.1 原代外植 207
11.3.2 酶的解離作用 210
11.3.3 溫胰蛋白酶消化 210
11.3.4 低溫預處理的胰蛋白酶消化 213
11.3.5 雞胚器官原基 216
11.3.6 其他酶解過程 219
11.3.7 膠原酶 220
11.3.8 機械法解離 222
11.3.9 分離活細胞 224
11.3.10 原代培養小結 225
11.3.11 原始記錄 225
第12章 傳代培養和細胞係 227
12.1 傳代培養和擴增 227
12.1.1 交叉汙染和鑒定錯誤 229
12.1.2 支原體汙染 231
12.1.3 術語定義 231
12.1.4 細胞係的命名 232
12.1.5 培養物的年齡 233
12.2 選擇細胞係 233
12.3 常規培養 234
12.3.1 細胞形態的意義 234
12.3.2 培養基的更換 235
12.3.3 標準的換液方案 236
12.4 傳代 238
12.4.1 傳代標準 240
12.4.2 單層生長細胞典型的傳代方案 241
12.4.3 生長周期和傳代比率 243
12.4.4 傳代時的細胞濃度 245
12.4.5 懸浮培養細胞的擴增 245
12.4.6 懸浮生長細胞的傳代 246
12.4.7 培養條件的標準化 248
12.4.8 抗生素的使用 248
12.4.9 培養記錄 249
第13章 剋隆培養及篩選 251
13.1 剋隆培養 251
13.2 貼壁率的刺激 255
13.2.1 促進剋隆生長的條件 255
13.2.2 條件培養基 256
13.2.3 飼養層細胞 257
13.3 懸浮剋隆培養 259
13.4 細胞剋隆的分離 264
13.4.1 單層貼壁細胞剋隆的其他分離技術 267
13.4.2 懸浮細胞剋隆 268
13.5 復製性培養 269
13.6 選擇性抑製劑 269
13.7 遺傳變異細胞的篩選 270
13.8 細胞與基質的相互作用 272
13.8.1 選擇性黏附 272
13.8.2 選擇性脫壁 272
13.8.3 基質性質 273
13.8.4 選擇性飼養層 273
13.8.5 半固體培養基選擇 273
第14章 細胞分離 275
14.1 細胞密度及等密度沉降法 275
14.2 細胞體積與沉降速率 279
14.2.1 單位重力沉降 279
14.2.2 離心淘洗分離技術 279
14.3 以抗體為基礎的分離技術 280
14.3.1 免疫盤化法 281
14.3.2 免疫磁珠分選 281
14.4 熒光活化的細胞分選法 284
14.5 其他分離技術 285
14.6 初學者如何進行細胞分離實踐 286
第15章 細胞鑒定 287
15.1 鑒定的需求 287
15.2 真實性驗證 287
15.3 保存記錄和身世 288
15.4 鑒定指標 288
15.4.1 種屬鑒定 289
15.4.2 譜係或組織標記 289
15.4.3 獨特標記物 291
15.4.4 轉化 291
15.5 細胞形態學 291
15.5.1 顯微鏡使用 295
15.5.2 染色 297
15.5.3 細胞學檢查所用培養器皿：單層
培養 299
15.5.4 懸浮細胞細胞學檢查標本的製備 299
15.5.5 光學顯微照相技術 302
15.6 共聚焦顯微鏡 303
15.7 染色體分析 303
15.7.1 染色體顯帶技術 306
15.7.2 染色體分析 307
15.8 DNA含量 308
15.8.1 DNA雜交 308
15.8.2 DNA指紋技術 308
15.8.3 DNA繪譜 309
15.9 RNA和蛋白質 314
15.10 酶活性 314
15.10.1 同工酶 314
15.10.2 利用Authentikit進行同工酶電泳 315
15.11 抗原標記 318
15.11.1 免疫染色 320
15.11.2 免疫分析 321
15.12 分化 322
第16章 分化 323
16.1 體內錶型的錶達 323
16.1.1 去分化 323
16.1.2 細胞譜係選擇 324
16.2 分化階段 324
16.3 增殖和分化 324
16.4 定嚮和細胞譜係 325
16.5 乾細胞可塑性 326
16.6 分化標記物 327
16.7 誘導分化 328
16.7.1 細胞相互作用 328
16.7.2 全身性因子 330
16.7.3 細胞-基質相互作用 333
16.7.4 極性和細胞形狀 334
16.7.5 氧張力 334
16.8 分化和惡性 334
16.9 應用 334
第17章 轉化和永生化 336
17.1 在細胞係鑒定中的作用 337
17.2 什麼是轉化 337
17.3 遺傳不穩定性和異質性 338
17.3.1 遺傳不穩定性 338
17.3.2 染色體畸變 339
17.4 永生化 339
17.4.1 衰老的控製 340
17.4.2 病毒基因緻永生化 341
17.4.3 人成縴維細胞的永生化 342
17.4.4 端粒酶誘導的永生化 345
17.4.5 淋巴細胞永生化 350
17.4.6 轉基因鼠 350
17.5 生長控製異常 350
17.5.1 停泊不依賴性 350
17.5.2 接觸抑製 351
17.5.3 血清依賴 353
17.5.4 癌基因 354
17.6 緻瘤性 354
17.6.1 惡性化 354
17.6.2 腫瘤移植 355
17.6.3 侵襲力 355
17.6.4 血管發生 356
17.6.5 縴溶酶原活化因子 359
第18章 汙染 361
18.1 汙染的來源 361
18.1.1 操作者的技術 363
18.1.2 環境 364
18.1.3 層流通風櫥的使用和維護 364
18.1.4 濕度恒溫箱 364
18.1.5 冷藏庫 365
18.1.6 無菌材料 366
18.1.7 引入的細胞係和活組織 366
18.1.8 隔離 366
18.2 微生物汙染的種類 366
18.3 汙染物的監控 366
18.3.1 可見的微生物汙染 367
18.3.2 支原體 368
18.3.3 支原體的熒光染色 369
18.3.4 PCR法檢測支原體 370
18.3.5 檢測支原體的替代方法 374
18.3.6 支原體檢測服務 375
18.3.7 病毒汙染 375
18.4 汙染培養物的處理 375
18.5 汙染的去除 376
18.5.1 細菌、真菌和酵母菌 376
18.5.2 支原體的消除 377
18.5.3 清除病毒汙染 378
18.5.4 頑固汙染 379
18.6 交叉汙染 379
18.7 結論 380
第19章 凍存 381
19.1 凍存的意義 381
19.2 凍存前注意事項 381
19.2.1 鑒定 382
19.2.2 何時凍存 382
19.3 凍存細則 382
19.3.1 細胞凍存的理論背景 382
19.3.2 細胞濃度 382
19.3.3 凍存液 383
19.3.4 冷卻速度 383
19.3.5 安瓿 386
19.3.6 低溫冰箱 386
19.3.7 培養細胞的凍存 389
19.3.8　凍存記錄 391
19.3.9 安瓿的解凍 392
19.3.10 培養瓶凍存 394
19.4 玻璃化保存 394
19.4.1 hES細胞的凍存 394
19.4.2 hES細胞解凍 397
19.5 凍存庫的設計和監控 398
19.5.1 凍存管理 399
19.5.2 細胞庫存的連續更換 399
19.6 細胞庫 400
19.7 細胞的運輸 400
19.7.1 凍存安瓿 401
19.7.2 活細胞 401
第20章 定量 403
20.1 細胞計數 403
20.1.1 血細胞計數器 404
20.1.2 電子計數 407
20.1.3 染色的單層細胞 411
20.1.4 流式細胞儀 411
20.2 細胞質量 413
20.3 DNA含量 413
20.4 蛋白質 414
20.4.1 樣品的溶解性 414
20.4.2 Bradford分析 414
20.5 閤成速率 415
20.5.1 DNA閤成 415
20.5.2 蛋白質閤成 417
20.6 準備樣品用於酶分析和免疫分析 418
20.7 細胞計數 419
20.7.1 原位標記 419
20.7.2 流式細胞術 419
20.8 重復取樣 419
20.8.1 數據獲得 419
20.8.2 數據分析 420
20.9 細胞增殖 420
20.9.1 實驗設計 421
20.9.2 生長周期 421
20.9.3 單層細胞生長麯綫的分析 425
20.9.4 培養基體積，細胞濃度和細胞密度 427
20.9.5 懸浮培養 428
20.9.6 生長周期的各個階段 429
20.9.7 生長麯綫的衍生物 430
20.10 貼壁效率 431
20.10.1 集落形成分析 433
20.10.2 自動集落計數 434
20.11 標記指數 434
20.11.1 生長分數 437
20.11.2 有絲分裂指數 438
20.11.3 分裂指數 438
20.12 細胞周期時間 438
20.13 細胞遷移 438
第21章 細胞毒性 439
21.1 活性、毒性和存活 439
21.2 體外局限性 440
21.2.1 藥物代謝動力學 440
21.2.2 新陳代謝 440
21.2.3 組織和全身反應 440
21.3 分析的性質 440
21.3.1 生存力 441
21.3.2 存活 443
21.3.3 細胞增殖測定 448
21.3.4 代謝性細胞毒性測定 448
21.3.5 微滴定實驗 449
21.3.6 微滴定與剋隆存活的比較 453
21.3.7 藥物的相互作用 454
21.4 細胞毒性實驗的應用 454
21.4.1 抗癌藥物篩選 454
21.4.2 腫瘤藥物的前瞻性實驗 454
21.4.3 藥物學實驗 455
21.5 基因毒性 455
21.5.1 姐妹染色單體交換的誘變實驗 455
21.5.2 緻癌性 458
21.6 炎癥反應 459
第22章 特殊類型細胞的培養 461
22.1 特殊細胞培養技術 463
22.2 上皮細胞 463
22.2.1 錶皮 464
22.2.2 角膜 469
22.2.3 乳腺 471
22.2.4 子宮頸 473
22.2.5 胃腸道 476
22.2.6 肝 478
22.2.7 原代肝細胞培養 478
22.2.8 人肝癌細胞係HepaRG 481
22.2.9 胰 483
22.2.10 腎 485
22.2.11 氣管和支氣管上皮 487
22.2.12 口腔上皮 489
22.2.13 前列腺 490
22.3 間充質細胞 492
22.3.1 結締組織 493
22.3.2 脂肪組織 493
22.3.3 肌 495
22.3.4 軟骨 501
22.3.5 骨 504
22.3.6 內皮細胞 506
22.4 神經外胚層細胞 512
22.4.1 神經細胞 512
22.4.2 神經膠質細胞 513
22.4.3 內分泌細胞 519
22.4.4 黑素細胞 520
22.5 造血細胞 523
22.6 生殖腺 524
22.6.1 卵巢 524
22.6.2 睾丸 524
第23章 乾細胞、生殖細胞和羊水細胞 525
23.1 乾細胞 525
23.1.1 胚胎乾細胞 525
23.1.2 小鼠胚胎乾細胞的誘導 525
23.1.3 小鼠胚胎乾細胞的傳代培養和擴增 530
23.1.4 人胚胎乾細胞的原代培養 532
23.1.5 hES細胞的傳代 534
23.1.6 魚胚胎來源的多能乾細胞 535
23.2 生殖細胞 539
23.3 胚外細胞 540
23.3.1 羊水細胞的培養 540
23.3.2 從新生兒或青年來源的細胞 544
23.3.3 成人來源的多能乾細胞 544
23.3.4 人骨髓來源間充質乾細胞 545
23.3.5 誘導多潛能乾細胞 548
23.3.6 小鼠骨髓長期培養 552
23.3.7 人原始造血細胞長期培養 554
23.3.8 造血細胞集落形成分析 559
第24章 腫瘤細胞培養 562
24.1 腫瘤細胞培養中的問題 562
24.2 取材 563
24.2.1 代錶性細胞的選擇 563
24.2.2 冷凍組織保存 564
24.3 分離 564
24.4 原代培養 565
24.5 腫瘤細胞的選擇培養 566
24.5.1 選擇培養基 566
24.5.2 匯閤飼養層 566
24.5.3 懸浮剋隆 569
24.5.4 異種移植 569
24.6 細胞係的建立 570
24.6.1 原代腫瘤培養物的傳代 570
24.6.2 連續細胞係 570
24.7 腫瘤細胞培養物的特徵 571
24.7.1 腫瘤細胞的異質性 571
24.7.2 組織型培養 572
24.8 特殊類型腫瘤 572
24.8.1 乳腺 572
24.8.2 肺 574
24.8.3 胃 575
24.8.4 結腸 575
24.8.5 胰腺 578
24.8.6 卵巢 578
24.8.7 前列腺 578
24.8.8 膀胱 579
24.8.9 皮膚 579
24.8.10 子宮頸 580
24.8.11 膠質細胞瘤 580
24.8.12 神經母細胞瘤 581
24.8.13 精原細胞瘤 581
24.8.14 淋巴瘤和白血病 581
第25章 三維培養 583
25.1 細胞的相互作用和錶型錶達 583
25.1.1 細胞密度的作用 583
25.1.2 相互作用 584
25.1.3 模型的選擇 584
25.2 器官培養 586
25.2.1 氣體和營養物質的交換 586
25.2.2 結構的完整性 586
25.2.3 生長與分化 587
25.2.4 器官培養的限製 587
25.2.5 器官培養的類型 587
25.3 組織型培養 589
25.3.1 凝膠和海綿技術 589
25.3.2 中空縴維 590
25.3.3 球體 590
25.3.4 轉動室係統 593
25.3.5 藻酸鹽活細胞固定術 594
25.3.6 濾膜培養皿 594
25.3.7 神經聚集物的培養 597
25.4 器官型培養 599
25.4.1 組織等同物 599
25.4.2 組織工程 599
25.5 三維構建物中細胞的成像 601
第26章 規模與自動化 602
26.1 懸浮規模培養 602
26.1.1 連續培養 605
26.1.2 規模和復雜性 606
26.1.3 攪勻和換氣 608
26.2 單層規模培養 610
26.2.1 多錶麵擴增器 610
26.2.2 鏇轉培養 613
26.2.3 微載體 615
26.2.4 巨型微載體 617
26.2.5 灌流式單層培養 619
26.3 程序控製 620
26.4 自動化 621
26.4.1 機器人細胞培養 621
26.4.2 高産量檢測 622
第27章 特殊技術 624
27.1 淋巴細胞的製備 624
27.1.1 隔離的密度 624
27.1.2 淋巴母細胞的轉化 625
27.2 放射自顯影術 626
27.3 間隔性記錄 632
27.4 細胞同步化 634
27.4.1 細胞分離 634
27.4.2 阻斷 635
27.5 冷血動物細胞的培養 635
27.5.1 魚細胞 636
27.5.2 昆蟲細胞 636
27.6 體細胞融閤 637
27.6.1 細胞雜交 637
27.6.2 移核實驗 640
27.7 單剋隆抗體的製備 640
第28章 培訓綱要 646
28.1 目的 646
28.2 實驗製備及操作技巧 647
28.3 基本的細胞培養技術 660
28.4 高階練習 682
28.5 特殊練習 697
第29章 問題與對策 698
29.1 細胞異常形態 698
29.2 細胞生長緩慢 699
29.2.1 僅限於自己細胞齣瞭問題 699
29.2.2 其他人也遇到同樣的問題 699
29.3 培養基 700
29.3.1 試劑配方、準備和存儲 700
29.3.2 不穩定試劑 701
29.3.3 配製培養基各種成分的純度 702
29.4 基質和容器 703
29.5 微生物汙染 703
29.5.1 僅限於單個實驗者的問題 704
29.5.2 普遍問題 705
29.5.3 室內供氣和層流淨化工作颱 706
29.5.4 特定汙染 706
29.6 化學汙染 707
29.6.1 玻璃器皿 707
29.6.2 移液管 707
29.6.3 水的純化 707
29.6.4 低溫凍存 707
29.6.5 粉末或氣溶膠 708
29.7 原代培養 708
29.7.1 原代培養的存活率低 708
29.7.2 選擇細胞錯誤 709
29.7.3 汙染 709
29.8 分化 710
29.9 飼養層 710
29.9.1 常規單層培養 710
29.9.2 剋隆培養 710
29.10 傳代 711
29.10.1 收獲率低或生長緩慢 711
29.10.2 生長不均勻 711
29.11 剋隆 712
29.11.1 培養皿形成的剋隆數過低 712
29.11.2 培養皿形成的剋隆數太多 713
29.11.3 非隨機分布 713
29.12 交叉汙染和錯誤標記 713
29.13 凍存 714
29.13.1 復蘇時存活率低 714
29.13.2 凍存後細胞形態發生變化 714
29.13.3 凍存細胞丟失 715
29.14 細胞計數 715
29.14.1 血細胞計數闆 715
29.14.2 使用電阻抗法電子計數儀 715
第30章 結語 717
附錄Ⅰ 計算配製及試劑製備 719
附錄II 設備及材料來源 733
附錄III 供應商和其他資源 763
附錄IV 術語 779
附錄V 交叉汙染或鑒定有誤的細胞係 789
附錄VI 一般教材與相關期刊 809
參考文獻 811
索引 883

前言/序言

好的，這是一份關於《動物細胞培養——基本技術和特殊應用指南（原書第六版）》之外，另一本專注於分子生物學技術和蛋白質組學前沿應用的圖書的詳細簡介。 --- 圖書名稱：《分子剋隆與蛋白質組學前沿技術：從基因編輯到高通量蛋白質組分析》 圖書定位與內容概述 本書旨在為生命科學研究人員、研究生以及生物技術從業者提供一個深入、前沿且實用的技術指南，聚焦於現代分子生物學核心技術，特彆是基因編輯工具的最新進展、核酸分析的高級策略，以及蛋白質組學分析的係統性方法。本書的結構緊密圍繞當代生物醫學研究中最關鍵的“信息獲取與操縱”環節展開，強調實驗設計的嚴謹性、數據分析的準確性，以及跨學科技術的整閤應用。 第一部分：基因組編輯與核酸操作的精進之道 本部分深入探討瞭當前分子生物學中最具革命性的技術——CRISPR/Cas係統。不同於側重於基礎細胞培養的書籍，本書的重點在於如何高效、精準地設計和執行基因編輯任務。 第一章：CRISPR/Cas係統的優化與變體應用 詳細介紹瞭CRISPR/Cas9、Cas12a（Cpf1）以及新型堿基編輯器（Base Editors）和先導編輯器（Prime Editors）的工作原理、優勢與局限性。內容包括：sgRNA的設計原則與算法選擇、脫靶效應的預測與最小化策略（如使用高保真Cas變體或優化遞送係統）。特彆強調瞭在不同物種（如哺乳動物、植物和微生物）細胞係中進行基因編輯的特異性挑戰與解決方案。 第二章：下一代測序（NGS）的文庫製備與數據解析 本章聚焦於從細胞或組織樣本中捕獲和分析遺傳信息的技術流程。內容涵蓋： 1. 全基因組重測序（WGS）與外顯子組測序（WES）：從DNA提取、片段化到文庫構建的質量控製標準。 2. RNA測序（RNA-Seq）：特彆關注轉錄組分析中的挑戰，如長鏈非編碼RNA（lncRNA）和環狀RNA（circRNA）的捕獲與定量。 3. 單細胞測序技術（scRNA-seq）：詳細介紹瞭液滴微流控技術（如10x Genomics平颱）的操作流程、數據去噪與細胞亞群聚類分析（使用Seurat或Scanpy等主流工具）。 第三部分：蛋白質組學的高通量解析策略 本部分是本書的核心特色之一，全麵覆蓋瞭從蛋白質分離、鑒定到功能分析的完整流程，尤其側重於定量蛋白質組學和翻譯後修飾（PTM）的研究。 第三章：蛋白質樣本製備與分離技術 強調瞭蛋白質組學分析成功與否的關鍵在於樣本的預處理。內容細緻入微地描述瞭： 1. 組織勻漿與細胞裂解的優化：如何選擇閤適的裂解液以最大程度保留PTM信息（如磷酸化、泛素化位點）。 2. 二維電泳（2D-PAGE）的現代應用：雖然是經典技術，但本書介紹瞭其在特定低豐度蛋白分離中的改進方法。 3. 高效液相色譜（HPLC）與超高效液相色譜（UHPLC）：蛋白質和肽段的分離梯度優化，用於耦閤質譜分析。 第四章：定量蛋白質組學與質譜分析 本章深入探討瞭基於質譜的定量技術： 1. 標記定量策略：詳細對比瞭代謝標記（如SILAC）、化學標記（如TMT/iTRAQ）和非標記定量（如Label-free Quantification）的實驗設計、樣本標記效率和數據準確性。 2. 質譜數據采集模式：從數據依賴采集（DDA）到數據非依賴采集（DIA）的轉換趨勢，並重點介紹瞭DIA在高深度和高重復性研究中的優勢。 3. 肽段鑒定與譜圖解釋：介紹瞭MaxQuant、Proteome Discoverer等主流軟件的使用技巧，以及如何驗證肽段序列的可靠性。 第五章：翻譯後修飾（PTM）的富集與位點鑒定 PTM是理解細胞信號傳導的關鍵。本章提供瞭針對特定PTM的富集技術： 1. 磷酸化蛋白質組學：使用金屬親和層析（如TiO2或Fe-IMAC）富集磷酸肽段的詳細步驟、洗脫條件優化，以及如何通過親本離子掃描（Parent Ion Scanning）技術進行高精度位點定位。 2. 泛素化與乙酰化研究：特定抗體親和純化（IP）結閤高分辨率質譜對泛素化連接位點的鑒定方法。 第六章：生物信息學整閤與數據可視化 現代蛋白質組學分析産生海量數據，本章提供瞭將原始數據轉化為生物學洞見的實用指南。內容包括： 1. 蛋白質豐度差異分析：使用T-test、ANOVA或基於經驗貝葉斯模型的統計方法進行差異蛋白質篩選。 2. 通路富集分析（GO/KEGG）：如何解釋差異蛋白與已知生物學功能和信號通路的相關性。 3. 蛋白質-蛋白質相互作用網絡（PPI）的構建與拓撲分析：利用STRING或Cytoscape等工具，識彆核心調控蛋白。 本書特色與目標讀者 本書避免瞭對基礎細胞培養環境（如培養基配方、無菌操作等）的冗餘敘述，而是專注於當前科研中最具挑戰性、對儀器和數據分析要求最高的分子操作和組學分析。 目標讀者：從事信號轉導、疾病機製研究、新藥靶點發現的博士後研究人員、高級實驗技術員以及希望係統學習前沿分子技術的研究生。它是一本將理論深度與實踐操作指南緊密結閤的“進階”工具書，旨在幫助研究人員跨越從單一基因/蛋白質研究到係統組學研究的鴻溝。本書的闡述方式力求詳實、嚴謹，如同資深實驗室導師的筆記，強調“為什麼這樣做”和“如何應對失敗”，而非僅僅羅列步驟。

評分☆☆☆☆☆

我是一名生物技術專業的學生，正在為我的畢業設計而煩惱。老師推薦瞭這本《動物細胞培養——基本技術和特殊應用指南（原書第六版）》，說它是細胞培養領域的“聖經”。一開始我還擔心這本書會太難，但當我真正翻開它，卻發現它非常有條理，而且有很多插圖和圖錶，讓我很容易就能理解。我尤其喜歡書中關於細胞工程部分的內容，它介紹瞭如何利用細胞培養技術來生産重組蛋白和疫苗，這些內容對我正在進行的畢業設計項目非常有幫助。書中還提供瞭一些成功的案例分析，讓我能夠看到這些技術在實際中的應用，這極大地激發瞭我的研究興趣。最重要的是，這本書讓我認識到，細胞培養不僅僅是一門技術，更是一門藝術，需要耐心、細緻和創造力。這本書為我打開瞭一扇新的大門，讓我對未來的研究方嚮有瞭更清晰的規劃。

評分☆☆☆☆☆

在我看來，一本好的圖書不僅僅是知識的載體，更是一種思想的啓迪。《動物細胞培養——基本技術和特殊應用指南（原書第六版）》就是這樣一本讓我受益匪淺的書。它不僅僅局限於對技術層麵的介紹，更在於它所蘊含的對科學研究的嚴謹態度和創新精神。我特彆欣賞書中在討論每一種技術時，都會追溯其發展曆程，並分析其優缺點，這讓我能夠更深刻地理解技術的演變和進步。例如，在介紹基因編輯技術在細胞培養中的應用時，書中不僅詳細闡述瞭CRISPR-Cas9等常用技術的原理和操作，還對其潛在的脫靶效應和倫理問題進行瞭探討，這種全麵而深入的視角，讓我能夠以更宏觀的眼光看待問題。此外，書中還包含瞭大量作者在實際研究中遇到的挑戰和解決方案，這些“乾貨”的分享，讓我覺得這本書更像是一位經驗豐富的前輩在指導我前進，充滿瞭人文關懷和智慧的光芒。

評分☆☆☆☆☆

老實說，我買這本書的初衷是希望能找到一些關於細胞功能研究的創新方法，因為我最近的研究陷入瞭瓶頸，急需一些新的思路。《動物細胞培養——基本技術和特殊應用指南（原書第六版）》在這方麵確實給瞭我很大的啓發。我特彆關注瞭書中關於細胞信號通路研究的部分，它不僅介紹瞭傳統的信號通路分析技術，還深入探討瞭如何利用細胞培養模型來模擬體內復雜的信號傳導過程。我記得書中有一個章節專門講解瞭如何通過共培養技術來模擬細胞間的相互作用，這對於研究腫瘤微環境下的細胞行為非常有價值。我嘗試瞭書中介紹的一種利用微流控芯片進行細胞分選和培養的技術，效果齣乎意料的好，極大地提高瞭我的實驗效率。而且，這本書的語言風格非常易於理解，即使是對一些復雜的概念，作者也能用清晰明瞭的語言來解釋，讓我能夠快速掌握其核心要點，並將其應用到我的實際研究中，這對於我突破研究瓶頸起到瞭關鍵作用。

評分☆☆☆☆☆

作為一個在細胞治療領域摸爬滾打多年的研究人員，我一直對動物細胞培養的技術細節有著近乎苛刻的要求。我一直以來都在尋找一本能夠真正滿足我研究需求的權威指南，而《動物細胞培養——基本技術和特殊應用指南（原書第六版）》無疑就是我尋覓已久的答案。《第六版》在繼承瞭前幾版優良傳統的基礎上，又融入瞭大量最新的研究進展和技術突破。特彆是在體外構建三維細胞模型方麵，本書提供瞭極其詳盡的實驗方案和理論解釋，這對於我正在進行的研究項目至關重要。我印象最深刻的是，書中對不同類型支架材料的性能分析以及如何根據細胞特性選擇閤適的培養基，這些細節的深入探討，直接提升瞭我實驗的可重復性和結果的可靠性。此外，對於一些高難度細胞係的培養，比如誘導多能乾細胞（iPSCs）和胚胎乾細胞（ESCs）的維持和分化，本書也給齣瞭非常係統和前沿的指導，這為我解決一些長久以來睏擾我的技術瓶頸提供瞭寶貴的思路。

評分☆☆☆☆☆

天哪，我最近剛入手瞭這本《動物細胞培養——基本技術和特殊應用指南（原書第六版）》，簡直是我的救星！我是一個剛踏入細胞培養領域的小白，之前看過的幾本書都太理論化瞭，看完還是不知道從何下手。這本書就不一樣瞭，它從最基礎的操作講起，比如無菌技術的重要性、細胞的計數和傳代，甚至細緻到如何正確地使用移液器！我記得我第一次嘗試解凍細胞就手忙腳亂的，多虧瞭書裏詳細的操作步驟和配圖，讓我少走瞭很多彎路。而且，它還貼心地列齣瞭很多在實際操作中容易遇到的問題以及解決方法，比如細胞汙染瞭怎麼辦？細胞生長緩慢的原因是什麼？這些問題我之前想都不敢想，現在都能自己分析和解決瞭，感覺自己像個小專傢一樣！最讓我驚喜的是，它還介紹瞭不同類型細胞的培養技巧，像我這種需要培養原代神經元的，在這本書裏找到瞭非常實用的指導，真是太到位瞭！這本書就像我實驗室裏最忠實的夥伴，隨時都能翻閱，解決我的燃眉之急。

評分☆☆☆☆☆

書不錯，紙質也挺好的，內容比較專業

評分☆☆☆☆☆

搞得心情不好，得不償失！??

評分☆☆☆☆☆

很厚重的一本書，詳細講解瞭細胞培養各個方麵的技術，比起第五版有不少的改進

評分☆☆☆☆☆

好書推薦，經典之作！

評分☆☆☆☆☆

很好

評分☆☆☆☆☆

書質量很好，沒有破損，很實用

評分☆☆☆☆☆

到貨速度很快，書也沒有摺痕，紙張來看應該是正版的。

評分☆☆☆☆☆

一共更換2次，第3次寄來的還是次品！沒有塑封，書脊碰爛，書籍內側有明顯黑手指印！！?

評分☆☆☆☆☆

很係統的一本書，但是但是翻譯的真心一般啊，而且文字錯誤也不少。