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內容簡介

《生物實驗室係列：冷泉港蛋白質組學實驗手冊》為美國冷泉港實驗室蛋白質組學課程培訓用書，為蛋白質組學工作者案頭必備實驗手冊。
內容涉及各種蛋白質製備和分離方法、質譜分析的一般方法、用於蛋白質錶達的編碼序列的高通量剋隆、蛋白質芯片的製備和使用以及驗證這些數據的分析方法等內容。書中附有大量的以step-by-step形式展現的操作程序，針對關鍵性步驟增加說明性文字加以點撥，並有信息框闡述關鍵的知識點，具有很強的實用性和可操作性。
《生物實驗室係列：冷泉港蛋白質組學實驗手冊》適用於生物、醫學基礎和藥學等專業研究生、高年級本科生和相關研究人員查閱參考。

目錄

簡介1實驗1全細胞裂解物的雙嚮凝膠電泳和MALDI 質譜分析
操作程序1.1酵母細胞裂解液的製備
操作程序1.2IPG膠條的再水化和等電聚焦
操作程序1.3等電聚焦膠條的平衡
操作程序1.4第二嚮--SDS.PAGE
操作程序1.5用SYPRO Ruby進行全蛋白染色
操作程序1.6用Pro.Q Diamond進行磷酸化蛋白染色
操作程序1.7用Pro.Q Emerald進行糖蛋白染色
操作程序1.8用考馬斯亮藍進行全蛋白染色
操作程序1.9用質譜兼容的銀染進行全蛋白染色
操作程序1.102D膠的圖像分析和蛋白質迴收
操作程序1.11膠內酶切
操作程序1.12MALDI點靶29實驗2用於質譜分析的蛋白質復閤物的純化
操作程序2.1培養並收集TAP標記的酵母細胞
操作程序2.2為純化TAP標記蛋白質復閤物製備酵母細胞抽提物
操作程序2.3第一步親和富集--利用IgG親和色譜從酵母抽提物中捕獲TAP標記的蛋白質復閤物
操作程序2.4第二步親和富集--TAP.標記的蛋白質復閤物的鈣調蛋白親和色譜
操作程序2.5與磁珠的結閤
操作程序2.6蛋白質復閤物的親和純化
實驗3用MALDI TOF/TOF串聯質譜進行肽的定性和定量分析
操作程序3.1實驗描述
實驗4蛋白質復閤物分析--高靈敏液相色譜與串聯質譜聯用
操作程序4.1HPLC柱毛細管的製作
操作程序4.2填裝微毛細管FSC柱
操作程序4.3微毛細管RP.HPLC與ESI.質譜聯用
實驗5用IMAC和質譜分析磷酸化肽
操作程序5.1製備IMAC樣品
操作程序5.2製備IMAC柱和反相捕獲柱（前柱）
操作程序5.3製備IMAC柱
操作程序5.4樣品處理
實驗6全細胞裂解物的多維蛋白質鑒定技術分析
操作程序6.1使用多維蛋白質鑒定技術分析全細胞裂解物
實驗7全細胞提取物的定量質譜檢測技術(iTRAQ)
操作程序7.1從酵母細胞製備肽
操作程序7.2以iTRAQ試劑標記肽
操作程序7.3應用反嚮色譜柱提純肽
操作程序7.4多肽等電聚焦95實驗8串聯質譜數據的分析及確認
操作程序8.1使用Global Proteome Machine係統分析LC.MS/MS數據
操作程序8.2使用ProteinPilot軟件進行肽段和蛋白質鑒定
操作程序8.3對數據庫檢索程序鑒定為能夠匹配肽段序列的MS/MS譜圖
進行評價118實驗9開放閱讀框的高通量剋隆--構建大量錶達結構
操作程序9.1利用Gateway LR反應構造錶達結構
操作程序9.2用Gateway LR反應産物化學轉化感受態細菌
實驗10蛋白質微陣列的構建--核酸可編程性蛋白質陣列
操作程序10.1用氨基甲矽烷包被載玻片
操作程序10.2在96孔闆中製備細菌的培養物
操作程序10.3從96孔闆中分離質粒DNA
操作程序10.4DNA的生物素化、沉澱及樣品布陣
操作程序10.5NAPPA載玻片上蛋白質的錶達
操作程序10.6檢測NAPPA載玻片上的蛋白質
操作程序10.7在NAPPA芯片上測定DNA151
實驗11使用核酸可編程性蛋白質陣列鑒定蛋白質.蛋白質相互作用
操作程序11.1NAPPA芯片與查詢蛋白共錶達
操作程序11.2在NAPPA芯片上檢測查詢蛋白
附錄1鈉升電噴霧電離離子源和串聯質譜裝置和示範
附錄2溶液內蛋白質的消化
附錄3凝膠內胰酶消化已分離蛋白
附錄4三氯乙酸蛋白質沉澱法
附錄5氨基酸的單同位素和亞銨離子分子量
附錄6氨基酸二肽分子量
附錄7LTQ離子阱的使用方法
附錄8肽段混閤物離綫去鹽
附錄9感受態細胞的製備
附錄10DNA的定量
附錄11注意事項
索引

精彩書摘

　　開始解析結果之前，記住以下幾個關鍵點是非常重要的。數據庫檢索是沒有偏嚮性的。數據庫中所有的蛋白質和肽段序列都會與每個MS／MS譜圖進行常規對比。檢索引擎不會做關於樣品中可能存在什麼蛋白質的任何假設。這也許是此技術最為重要和最為有力的方麵。齣乎預期的蛋白質能夠被鑒定到，研究者可能沒有預計到這些蛋白質會在樣品中存在。隻有蛋白質數據庫中存在的肽段和蛋白質會在輸齣文件中列齣。如果一個蛋白質或肽段的序列不在數據庫中，那它將不會被鑒定到。檢索算法不會進行MS／MS譜圖的從頭序列分析（de novo sequencing）並産生肽段序列。程序隻會使用設置的參數將數據庫中的肽段序列與MS／MS譜圖進行匹配。分子量大的蛋白質與分子量小的蛋白質相比，更容易被鑒定到。LC—MS／MS方法隻會將樣品中胰酶消化後的全部肽段中的一部分進行碎裂。一個蛋白質經胰酶消化後産生的肽段越多，此蛋白質産生的肽段被選擇進行碎裂的機會就越多。分子量小的蛋白質經胰酶消化後隻會産生很少的幾個肽段，有可能會逃脫檢測。LC—MS／MS和MALDI—MS方法在碎裂來源於高峰度蛋白的肽段時存在偏好性。由於選擇母離子用於碎裂的過程通常根據離子峰的強度，因此離子強度較強的峰將被選擇進行碎裂，一而離子強度較弱的峰將會被忽略並很可能逃脫碎裂。盡管肽段離子化的效率不同，但是平均來講，一個肽段或蛋白質的豐度越高，産生具有強信號母離子肽段的可能性就越大。低豐度肽段和蛋白質會逃脫檢測。發生未知氨基酸改變或替換的肽段不會匹配到蛋白質數據庫中的任一序列，也不會被列齣。再一次說明，不在數據庫中的蛋白質序列不會被鑒定到。某些數據庫檢索程序可以進行稱之為“同源性”（homology）的檢索，這種檢索方式允許存在氨基酸替換。任何具有在檢索參數中沒有指明的修飾氨基酸的肽段將不會被列齣。這些肽段將會逃脫檢測。檢索程序隻會檢索並列齣那些具有檢索參數中已包含的修飾氨基酸的肽段。既然LC—MS／MS的優缺點都與數據庫檢索分析息息相關，下麵我們將描述一個用於初步評價數據庫檢索結果的方法。

前言/序言

21世紀是生命科學的世紀，這已成為人們的共識。
生命科學隨著人類對自身和自然的認識、探索而萌芽，隨著人類生産和科學實踐的進步而發展。現代生命科學包括生物學、醫學、農學等傳統學科領域，以及生物學、生物技術與環境科學乃至社會科學等其他學科相互滲透、交叉而産生的新型學科體係。20世紀後葉，現代生物科學尤其是分子生物學取得瞭一係列突破性成就，使得生命科學在自然科學體係中的位置發生瞭革命性的變化，成為21世紀的帶頭學科。人們對生命科學也寄予瞭無限的期望，希望能夠解決人類社會所麵臨的人口膨脹、資源匱乏、疾病危害、環境汙染和生態破壞等一係列重大問題。
迴顧生命科學的發展曆程，實驗技術一直起著非常重要的促進作用。如17世紀Ｌｅｅｕｗｅｎｈｏｅｋ等人發明並應用顯微鏡技術，直接催生瞭“細胞學說”的建立和發展；1973年Ｃｏｈｎ和Ｂｏｙｅｒ完成瞭ＤＮＡ體外重組實驗，標誌著基因工程的肇始；1988年Ｋａｒｙ Ｍｕｌｌｉｓ發明的ＰＣＲ技術甚至使生命科學産生瞭飛躍性的發展。可以說，生命科學每時每刻離不開實驗，實驗是開啓神奇的生命王國大門的鑰匙。沒有實驗技術的不斷進步，也就沒有生命科學今天的巨大發展；同時，生命科學的發展又對實驗技術提齣瞭更高的要求，進一步刺激瞭後者的不斷進步。生命科學正是在“實驗催生和驗證著基礎理論，理論指導和發展瞭實驗技術”的不斷循環中從必然王國走嚮自由王國。
工欲善其事，必先利其器。為瞭有助於生命科學工作者更多地瞭解相關實驗技術和儀器設備，更好地設計實驗方案，更有效地開展實驗過程，更閤理地處理實驗結果，化學工業齣版社組織齣版瞭《生物實驗室係列》圖書。係列圖書在整體規劃的基礎上，本著“經典、前沿、實用，理論與技術並重”的原則組織編寫，分批齣版。
在題材上，係列圖書涵蓋綜閤實驗技術和單項實驗技術兩個方麵。其中綜閤實驗技術既有以實驗目的為題，如“蛋白質化學分析技術”，內容縱嚮覆蓋多項實驗技術；也有以某一生命學科領域的綜閤實驗技術為題，如“發酵工程實驗技術”、“生物化學實驗技術”等。而單項實驗技術則以深入介紹某一專項技術及其應用為主，在闡述其基本原理的基礎上，橫嚮介紹該項技術在多個領域的應用，如“雙嚮電泳技術”、“流式細胞術”等。
在內容上，係列圖書主要有以下兩個顯著特點。一是強調先進性——除瞭係統介紹常用和經典實驗技術以外，特彆突齣瞭當前該領域實驗手段的新理論、新技術、新發展，為國內專業人員起到藉鑒和引導作用。二是強調可操作性——對於每一項實驗技術，係統介紹其原理方法、設備儀器和實驗過程，讓讀者明瞭實驗的目的、方案設計以及具體步驟和結果處理，以期起到實驗指南的作用。
本係列圖書堅持質量為先，開拓國內和國際兩個齣版資源。一方麵，邀請國內相關領域兼具理論造詣和豐富實驗室工作經驗的專傢學者編著；另一方麵，時刻關注國際生命科學前沿領域和先進技術的進展，及時引進(翻譯或影印)國外知名齣版社的權威力作。
《生物實驗室係列》圖書的讀者對象設定為國內從事生命科學及生物技術和相關領域(如醫學、藥學、農學)的專業研究人員，企業或公司的生産、研發、管理技術人員，以及高校相關專業的教師、研究生等。
我們殷切希望《生物實驗室係列》圖書的齣版能夠服務於我國生命科學的發展需要，同時熱忱歡迎從事和關心生命科學的廣大科技人員不僅對已齣版圖書提供寶貴意見和建議，也能對係列圖書的後續題目設計貢獻良策或推薦作者，以便我們能夠集思廣益，將這一係列圖書沿著可持續發展的方嚮不斷豐富品種，推陳齣新。
謹嚮所有關心和熱愛生命科學，為生命科學的發展孜孜以求的科學工作者緻以崇高的敬意！
祝願我國的科技事業如生命之樹根深葉茂，欣欣嚮榮！
化學工業齣版社生物·醫藥齣版分社

譯者的話
基因組學研究揭示瞭生命的藍圖，而功能基因組學研究纔能使我們真正瞭解生命的本質。蛋白質是生命活動的體現者，以其作為研究對象的蛋白質組學是功能基因組學研究的重要組成部分。由於蛋白質幾乎參與並主導瞭生物體中的任何一種生命活動，所以當疾病發生時其往往處於問題的核心，並且幾乎所有藥物都是通過修飾蛋白質功能起作用。這決定瞭蛋白質在疾病發病機理及防治研究中舉足輕重的地位。同時，正是由於蛋白質參與瞭各種各樣、形形色色的生命活動，使其具有獨特的化學特性，遠比通過以較為單一的氫鍵配對形成的DNA復雜得多。因此，針對蛋白質研究的方法也多種多樣，並且隨著物理、化學等其他學科的發展，不斷産生新的研究方法。但是，這些方法無論在成熟度還是在高通量方麵都需要進一步發展。
為瞭迎接蛋白質組學研究時代的到來， Andrew J�盠ink和Joshua LaBaer教授通過對學生6年多來的蛋白質組學課程的教學實踐，在不斷修改與完善的基礎上，總結齣版瞭本書，包括各種蛋白質製備和分離方法、質譜分析的一般方法、用於蛋白質錶達的編碼序列的高通量剋隆、蛋白質芯片的製備和使用以及驗證這些數據的分析方法等內容。冷泉港實驗室的《分子剋隆實驗指南》曾影響瞭一代又一代國內的分子生物學研究的科學工作者，希望本書也能對國內蛋白質組學研究起到一定的推動作用。
中國食品藥品檢定研究院和軍事醫學科學院生物工程研究所的相關實驗室多年來一直從事蛋白質組學研究工作，在化學工業齣版社的大力支持下，近年來在學習與工作之餘組織瞭工作在科研一綫的研究人員和研究生翻譯瞭包括該手冊在內的多本蛋白質組學專著。 由於蛋白質組學的快速發展，而我們的知識有限，譯文中難免存在疏漏和謬誤之處，懇請同行和廣大讀者不吝指正，譯者將不勝感激。
譯者
生物實驗室係列：冷泉港蛋白質組學實驗手冊 下載 mobi epub pdf txt 電子書

評分☆☆☆☆☆

挺不錯。物有所值。挺實用的。

評分☆☆☆☆☆

《生物實驗室係列：冷泉港蛋白質組學實驗手冊》為美國冷泉港實驗室蛋白質組學課程培訓用書，為蛋白質組學工作者案頭必備實驗手冊。

評分☆☆☆☆☆

非常好，物流給力，值得購買

評分☆☆☆☆☆

好評。送貨快速，物美價廉

評分☆☆☆☆☆

《生物實驗室係列：冷泉港蛋白質組學實驗手冊》適用於生物、醫學基礎和藥學等專業研究生、高年級本科生和相關研究人員查閱參考。

評分☆☆☆☆☆

買錯瞭，是要冷泉港的純化

評分☆☆☆☆☆

挺不錯。物有所值。挺實用的。

評分☆☆☆☆☆

nice，一直想要的書

評分☆☆☆☆☆

慢慢學吧，感覺書本不錯吧

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